Protein A 和 G 色譜柱對(duì)抗體均具有高親和性，因此它們僅結(jié)合細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的抗體。然而，它們的選擇性各有不同。例如，Agilent Bio-Monolith Protein A 色譜柱對(duì)人 IgG1、IgG2 和 IgG4 亞型具有高親和力，對(duì) IgG3 沒(méi)有親和性，而 Agilent Bio-Monolith Protein G 色譜柱對(duì)人 IgG1、IgG2、IgG3 和 IgG4 亞型都具有高親和力。IgG1 憑借其穩(wěn)定性（半衰期較長(zhǎng)）、在血清中的豐度以及較少出現(xiàn)聚集，成為最常用的生物治療藥物。通常不使用 IgG3，因?yàn)樗菀拙奂也惶€(wěn)定。相反，Protein G 色譜柱對(duì)人亞類(lèi)單克隆抗體（例如 IgA 和 IgD）沒(méi)有親和性，但是 Protein A 色譜柱能夠與這些抗體結(jié)合（表 1）。這些色譜柱相互補(bǔ)充，Protein G 對(duì)不與 Protein A 結(jié)合的 mAb 具有親和性，反之亦然（圖 1）。因此，它們能夠?qū)崿F(xiàn)目前作為生物治療藥物進(jìn)行開(kāi)發(fā)的各種 mAb 亞類(lèi)和片段的滴度測(cè)定。

*Protein A 和 G 對(duì)不同抗體的相對(duì)親和性表示法：++++ = 強(qiáng)親和性，+++ = 中等親和性，++ = 弱親和性，+ = 微弱親和性，- = 無(wú)親和性。

親和色譜的樣品前處理方法與 HPLC 蛋白質(zhì)分析的樣品前處理方法類(lèi)似。進(jìn)樣前需要極少的樣品前處理，以?xún)?yōu)化色譜柱性能并延長(zhǎng)色譜柱壽命。

Agilent Bio-Monolith rProtein A（重組 Protein A）分析柱是 Bio-Monolith 和親和色譜家族的新成員。該色譜柱可用于高速分析單克隆抗體 (mAb) 滴度和小規(guī)模純化，并可輕松集成到二維液相色譜等其他分析工作流程中。本研究以最大流速測(cè)試了重組 Protein A 色譜柱，證明了一種色譜結(jié)合/洗脫法可用于測(cè)定 mAb 滴度，該方法具有非常短的運(yùn)行時(shí)間（1 分鐘），適用于克隆篩選、工藝開(kāi)發(fā)及優(yōu)化等高通量應(yīng)用。

此外，本篇應(yīng)用文集中還包含使用 Agilent Bio-Monolith Protein A HPLC 色譜柱縮短定量分析人 IgG 的分析周期、使用 Agilent Bio-Monolith Protein A 色譜柱和 LC/MS 進(jìn)行的細(xì)胞培養(yǎng)優(yōu)化等應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)供您查閱。