一、激光掃描共聚焦熒光顯微鏡(laserscanningconfocalmicroscopy,LSCM)是一種利用計算機、激光和圖像處理技術獲得生物樣品三維數(shù)據、先進的分子細胞生物學的分析儀器。主要用于觀察活細胞結構及特定分子、離子的生物學變化,定量分析,以及實時定量測定等。
二、原理:
(1)采用點光源照射標本,在焦平面上形成一個輪廓分明的小的光點,該點被照射后發(fā)出的熒光被物鏡收集,并沿原照射光路回送到由雙向色鏡構成的分光器。
(2)分光器將熒光直接送到探測器。光源和探測器前方都各有一個針孔,分別稱為照明針孔和探測針孔。兩者的幾何尺寸一致,約100-200nm;相對于焦平面上的光點,兩者是共軛的,即光點通過一系列的透鏡,最終可同時聚焦于照明針孔和探測針孔。
(3)每一幅焦平面圖像實際上是標本的光學橫切面,這個光學橫切面總是有一定厚度的,又稱為光學薄片。由于焦點處的光強遠大于非焦點處的光強,而且非焦平面光被針孔濾去,因此共聚焦系統(tǒng)的景深近似為零,沿Z軸方向的掃描可以實現(xiàn)光學斷層掃描,形成待觀察樣品聚焦光斑處二維的光學切片。
(4)激光共聚焦的工作原理簡單表達就是它采用激光為光源,在傳統(tǒng)熒光顯微鏡成像的基礎上,附加了激光掃描裝置和共軛聚焦裝置,通過計算機控制來進行數(shù)字化圖像采集和處理的系統(tǒng)。
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