手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
應(yīng)用文集｜完整蛋白質(zhì)和亞基純度“柱”力提高生物制藥關(guān)鍵質(zhì)量屬性
反相色譜仍然是色譜工作者“武器庫”中最有價(jià)值的工具之一。這是一種廣為人知的技術(shù)，依賴于分析物和固定相之間的疏水相互作用。對于完整蛋白質(zhì)，該技術(shù)使用有機(jī)溶劑梯度作為流動(dòng)相，通常使用離子對試劑。在這些條件下，分子很可能發(fā)生變性。這是一種靈敏的分析技術(shù)，因?yàn)闃悠繁Ａ粼谏V柱上得到濃縮，且適用于質(zhì)譜分析。因此，該技術(shù)適用于測定完整蛋白質(zhì)的精確質(zhì)量。
對于大分子蛋白質(zhì)（例如單克隆抗體），甚至對于較小的片段（例如重鏈和輕鏈或 IgG 分子的 Fab 和 Fc 區(qū)域），推薦使用大孔徑色譜柱。安捷倫能夠提供多種配置的 300 ? 和 450 ? 產(chǎn)品，包括全多孔、采用表面多孔顆粒的 Poroshell 技術(shù)以及一系列烷基鍵合相。鍵合相通常具有較短的碳鏈長度（C8 或 C4/C3）或具有更多獨(dú)特的配體，例如可提供不同選擇性的二苯基。由于反相色譜分析準(zhǔn)確度高，因此可以使用完整蛋白質(zhì)和片段分析來比較生物治療藥物的生物仿制藥與原研藥。然而，始終需要執(zhí)行額外的測試以鑒定可能檢出的不同異構(gòu)體的具體位置。
色譜柱選擇
選擇用于完整蛋白質(zhì)分析的反相色譜柱時(shí)需要考慮多個(gè)相互關(guān)聯(lián)的因素：樣品分子量和最適合的填料孔徑，色譜柱固定相，所用的儀器（特別是檢測器的類型），流動(dòng)相條件，以及速度或通量要求等。
分析物分子越大，則需要越大的孔徑。除一些例外情況，用于完整蛋白質(zhì)分析的孔徑通常為 300–500 ?。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，孔徑至少應(yīng)為蛋白質(zhì)流體動(dòng)力學(xué)半徑的三倍。AdvanceBio RP-mAb 色譜柱具有 450 ? 的孔徑，ZORBAX RRHD 300 ?、ZORBAX 300SB 和 Poroshell 300 均具有 300 ? 的孔徑，而 PLRP-S 提供多種孔徑。雖然 1000 ? 的 5 µm PLRP-S 色譜柱孔徑明顯大于常用于完整蛋白質(zhì)分析的色譜柱，但是該色譜柱可為完整蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)片段分析提供優(yōu)異的結(jié)果。
對于反相色譜柱，選擇色譜柱固定相的通用指南是，分子量越大，使用的烷基鏈應(yīng)越短。因此，C18 色譜柱常用于多肽分析，而 C8、C4 和 C3 色譜柱常用于完整蛋白質(zhì)分離。除線性烷基鏈以外，AdvanceBio RP-mAb、ZORBAX RRHD 300 和 ZORBAX 300SB 色譜柱可提供二苯基固定相。有時(shí)，二苯基固定相的不同選擇性可提供所需的分離。PLRP-S 是一種聚合物填料而不是硅膠基填料。它提供典型的反相分離以及略有不同的選擇性和寬 pH 耐受性。
此外，本篇應(yīng)用文集中還包含 AdvanceBio RP mAb、PLRP-S、AdvanceBio HIC、ZORBAX RRHD 300SB 等應(yīng)用簡報(bào)供您查閱，為生物治療藥物關(guān)鍵質(zhì)量屬性提供新方法，新思路。
“碼”上領(lǐng)取
掃描如下二維碼，即可免費(fèi)領(lǐng)取安捷倫生物色譜柱完整蛋白質(zhì)和亞基純度應(yīng)用文集。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心