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紫外分光光度法是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜，來研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。紫外分光光度計可以在紫外可見光區(qū)任意選擇不同波長的光。物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結(jié)果。
當(dāng)以空白試劑為參比調(diào)節(jié)儀器零點時，比色皿窗材料的吸收、內(nèi)外窗面的散射以及溶劑的吸收等都被抵消，所得吸光度值由顯色溶液中待測離了濃度所決定。此時吸光度值與試液濃度一般呈線性關(guān)系。吸光度值與測定濃度不成直線關(guān)系，發(fā)生向下彎曲(負(fù)偏離)或向上彎曲(正偏離)的現(xiàn)象而偏離朗伯一比爾定律的主要原因如下。
(1)非單色光的影響： 紫外一可見分光光度訃使用連續(xù)光源和分光器分光，不可能得到真正理想的單色光；為保證在測量中能得到充分的光強，儀器必須保持一定的狹縫寬度。由狹縫射出后投射到被測物質(zhì)上的光，是一個有限寬度的譜帶——光譜通帶。隨光譜通帶寬度的增大，吸收光譜的分辨率降低，并偏離朗伯一比爾定律。
(2)非吸收光的影響：當(dāng)來自出射狹縫的光的光譜通帶寬度大于吸收光譜譜帶時，投射在被測物質(zhì)上的光就含有非吸收光。這不僅能使靈敏度降低，且能使校準(zhǔn)曲線向橫坐標(biāo)軸彎曲而偏離朗伯一比爾定律。
(3)非平行光的影向：當(dāng)入射光與比色皿的光學(xué)面不垂直時，通過被測物質(zhì)的實際光程就大于比色皿的厚度。這種情況所造成的影響很小，一般可忽略不計。
(4)散射的影響：當(dāng)被測物質(zhì)不均勻，其巾含有微小顆粒物，如懸浮物或膠態(tài)粒子等散射質(zhì)點時，入射光通過該物質(zhì)就會使部分光被散射而損失，從而減小了透射光的性度，增大了實際吸光度，導(dǎo)斂偏離朗伯一比爾定律。
(5)熒光的影響：某些物質(zhì)吸收光后能再新輻射出波長和入射光波長相近的熒光而導(dǎo)致朗們一比爾定律失效?；瘜W(xué)反應(yīng)的影響 在被測溶液中待測組分發(fā)發(fā)生解離、締合、光化等作用，或與溶劑相互作都將使待測組分的吸收曲線發(fā)生明顯的改變，如吸收峰的形狀、位置、強度以及精密結(jié)構(gòu)都會發(fā)生變化，從而導(dǎo)致偏離朗伯一比爾定律。
(6)溶劑的影響：溶劑對吸收光潛的影響頗為最要。輔射能引起某化合物的分解而導(dǎo)致偏離朗們比爾定律。
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