氯霉素是一種高效廣譜的抗生素,對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均有較好的抑制作用。人體過量攝入氯霉素可能引起人肝臟和骨髓造血機能的損害,導(dǎo)致再生障礙性貧血和血小板減少、肝損傷等健康危害?!妒称分锌赡苓`法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑品種名單(第五批)》(整頓辦函〔2011〕1號)中規(guī)定,氯霉素在肉制品中不得檢出。肉制品中檢出氯霉素的原因,可能是生產(chǎn)企業(yè)采購了含有氯霉素的原料肉;也可能是生產(chǎn)過程中衛(wèi)生控制和出廠檢驗不嚴(yán)格。
深圳艾瑞斯生產(chǎn)的氯霉素膠體金快速檢測卡應(yīng)用競爭抑制膠體金免疫層析的原理制成,用于檢測組織樣本中氯霉素(Chloramphenicol,CAP)。樣本溶液滴入檢測卡的加樣孔后,樣本溶液中的氯霉素與金標(biāo)抗體相結(jié)合,從而阻止金標(biāo)抗體與纖維素膜上氯霉素偶聯(lián)物結(jié)合。當(dāng)樣本溶液中的氯霉素含量大于檢測限時檢測線不顯色,結(jié)果為陽性;當(dāng)樣本溶液中氯霉素含量小于檢測限時檢測線顯紫紅色(T線與C線一致或更深),結(jié)果為陰性。
樣本前處理:
1、取切碎的一定量的去脂肪畜產(chǎn)品組織樣品,用均質(zhì)機均質(zhì);
2、稱取約2 g 均質(zhì)物于15 mL 離心管中;
3、依次加入2 mL純凈水和2 mL乙酸乙酯,劇烈振蕩混勻;
4、室溫下(20-25℃) 4000 轉(zhuǎn)/分鐘 離心5 分鐘;
5、用移液器移取 1 mL 上清液于10 mL離心管中,65℃下氮(空)氣吹干,得固體殘渣;
6、先加入1 mL正己烷,振蕩混合均勻;再加入0.3 mL樣本復(fù)溶液,混合均勻后靜置,液體明顯分層,取下層液體備用。
氯霉素膠體金快速檢測卡樣品檢測:
1、從原包裝袋中取出試劑板,水平放置于觀察者正面;
2、吸取下層液體120μL于金標(biāo)微孔中,吹打混勻(至少吹打10次),直至金標(biāo)微孔內(nèi)紅色物質(zhì)完全溶解,等待2分鐘,吸取全部液體滴加到檢測卡的加樣孔中;
3、 加樣后開始計時,室溫下放置8-10分鐘判斷結(jié)果,超過10分鐘的結(jié)果只能作為參考。
結(jié)果判斷:
陰性:對照線(C)出現(xiàn)紫紅色線,檢測線(T)顯色。
陽性:對照線(C)出現(xiàn)紫紅色線,檢測線(T)不顯色。
失效:在檢測窗內(nèi),對照線(C)不出現(xiàn)紫紅色線。
注意事項:
1、過期或鋁箔袋破損的產(chǎn)品,均不可使用。
2、 檢測卡從冰箱中取出時應(yīng)恢復(fù)到室溫后打開,打開的檢測卡應(yīng)盡快使用以免受潮后失效。
3 、不要觸摸檢測卡中央的白色膜面。
4 、取液滴管不可混用,以免交叉污染。
5 、待檢樣品溶液需清亮、無混濁顆粒、無細菌污染,否則容易導(dǎo)致阻塞、顯色不明顯等異?,F(xiàn)象,從而影響實驗結(jié)果的判定。
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