微生物污染是一直是細(xì)胞培養(yǎng)的一個(gè)主要問(wèn)題，大到諸如細(xì)胞間、層流室這種實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)布局，小到每一次試劑外包裝的消毒，都是在為了細(xì)胞免受外源微生物的侵害。應(yīng)各位老師們的要求，今天這篇文章主要講解細(xì)胞房的除菌方案，順便討論一下常見(jiàn)的無(wú)菌操作漏洞。

當(dāng)您和同門(mén)的細(xì)胞頻繁出現(xiàn)污染，更換試劑之后仍然不能改善，細(xì)胞丟棄一波又一波，建議為細(xì)胞間來(lái)場(chǎng)消毒吧。無(wú)論是紫外線照射（物理方法）還是甲醛加高錳酸鉀熏蒸，都是為了盡可能的殺滅空氣中的微生物。

圖1 細(xì)胞室

一、紫外線照射法

紫外線按照波長(zhǎng)劃分為四個(gè)波段：長(zhǎng)波UVA、中波UVB、短波UVC、真空波UVD。波長(zhǎng)越長(zhǎng)，穿透能力越強(qiáng)，其中UVC（波長(zhǎng)200～280nm）被用來(lái)做紫外線殺菌燈，可作用于DNA使一條DNA鏈上相鄰的兩個(gè)胸腺嘧啶共價(jià)結(jié)合而形成雙聚體改變了DNA的分子結(jié)構(gòu)，干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄導(dǎo)致細(xì)菌死亡或變異，缺點(diǎn)也是顯而易見(jiàn)的，UVC穿透力差，無(wú)法穿透大部分的透明玻璃及塑料，同時(shí)短時(shí)間照射即可灼傷皮膚，長(zhǎng)期或高強(qiáng)度照射還會(huì)造成皮膚癌。

圖2

這里提示在購(gòu)買(mǎi)紫外線消毒燈的時(shí)候登錄全國(guó)消毒產(chǎn)品網(wǎng)上備案信息服務(wù)平臺(tái)查詢備案，可以看到生產(chǎn)許可證，檢測(cè)報(bào)告等信息。

具體可參照：約13m²的房間30w紫外燈（距地面約2.5m）照射1h，照射前抹凈燈管灰塵，建議一周一次。照射時(shí)人員禁止入內(nèi)。

圖3 消毒產(chǎn)品網(wǎng)上備案信息

二、甲醛加高錳酸鉀熏蒸法

甲醛無(wú)易燃易爆危險(xiǎn)易于獲得故在消毒與滅菌方面使用較為普遍。醛類(lèi)主要通過(guò)凝固蛋白質(zhì)還原氨基酸使蛋白質(zhì)分子烷基化而殺滅細(xì)菌和其他微生物，KMnO4是一個(gè)強(qiáng)氧化劑，它會(huì)使得菌體酶蛋白失去活性，代謝機(jī)能障礙而死亡。這種方法的缺點(diǎn)是醛蒸氣刺激性較大對(duì)人體有害，是致癌物質(zhì)，并且對(duì)呼吸道的刺激較大。具體可參照：每立方米加甲醛80ml：高錳酸鉀40g（2:1的比例），一定要先將高錳酸鉀倒入敞口容器，再加入40%的甲醛！密閉熏蒸24h左右，充分通風(fēng)（至少24h）在確保細(xì)胞房?jī)?nèi)沒(méi)有甲醛的刺激性氣味后實(shí)驗(yàn)人員才能進(jìn)入。

安全提示：動(dòng)作要迅速，兩者反應(yīng)較強(qiáng)烈，做好防護(hù)，注意不要濺到！甲醛遇到KMnO4會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)烈的氧化反應(yīng)，濺出來(lái)是很危險(xiǎn)的，所以一定要使用敞口容器！??！

兩者相比，甲醛熏蒸法效果更好，特別對(duì)于一些較難消除的真菌，但是由于甲醛的致癌性，不建議頻繁使用，可以結(jié)合紫外線照射法交替進(jìn)行。

三、細(xì)胞房除菌劑

在進(jìn)行紫外線照射或者甲醛熏蒸之前，需要對(duì)細(xì)胞間各個(gè)角落進(jìn)行擦拭，愛(ài)必信細(xì)胞房清除劑，用于細(xì)菌、真菌清除，具有很強(qiáng)的抑菌功能，可用于細(xì)胞房的污染控制，通過(guò)清除細(xì)胞房?jī)?nèi)細(xì)菌、真菌及其孢子，可有效防止細(xì)胞的污染。

圖4 細(xì)胞房除菌劑

使用方法：

1）直接對(duì)細(xì)胞房的死角、墻面、空間進(jìn)行噴灑，也可倒出少許，將脫脂棉球浸泡后擦拭使用。 建議一周處理一次，配合紫外線使用效果更佳。
2）建議每立方米(m^3)使用量為5~8mL，如10m^2、高3m的房間推薦用量為150mL。遇污染爆發(fā)時(shí)期，如梅雨季節(jié)等，可適當(dāng)增加用量。若室內(nèi)墻壁上有霉菌生長(zhǎng)，可噴灑于墻壁表面，或者用浸泡后的棉球擦拭。

溫馨提示：

1）操作時(shí)，穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)服和手套操作；
2）處理后，人盡量遠(yuǎn)離細(xì)胞培養(yǎng)室，待密封20~30 min 通風(fēng) 10min 后再使用；
3）避免直接接觸皮膚、眼睛，一旦接觸，應(yīng)立即用大量的清水沖洗，不要延誤。

圖5 實(shí)驗(yàn)室清潔劑

[1] 劉水平,羅志勇.細(xì)胞培養(yǎng)室空氣消毒效果的檢測(cè)[J].生物醫(yī)學(xué)工程研究,2006(01):53-54.

今天的講解就到這里啦，感興趣的老師們可以公眾號(hào)“愛(ài)必信生物”后臺(tái)留言哦。

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