國際實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源發(fā)展現(xiàn)狀
美國是生命科學(xué)技術(shù)發(fā)達(dá)的國家,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源在其中發(fā)揮了重要的支撐作用。近50年來,美國國立衛(wèi)生研究院(NIH)通過其下屬的美國國家研究資源中心(NCRR)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源、設(shè)施等進(jìn)行了大規(guī)模的建設(shè),形成了齊全的從昆蟲、水生生物、嚙齒類到非人靈長(zhǎng)類等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源體系。在美國有1300個(gè)有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物工作的生產(chǎn)與研究單位。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物工作已形成為一個(gè)專業(yè)化、規(guī)格化、商品化和社會(huì)化的科研和經(jīng)濟(jì)體系。
NCRR是NIH下屬的一個(gè)非營利機(jī)構(gòu),以項(xiàng)目資助的方式管理美國研究資源。美國NIH和其名下的比較醫(yī)學(xué)部或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中心多沒有隸屬關(guān)系,只是要從NIH獲取資助就要服從NIH的管理。NCRR有個(gè)比較醫(yī)學(xué)部(DCM),負(fù)責(zé)資助個(gè)人或研究機(jī)構(gòu)以促進(jìn)這些資源單位為生物醫(yī)學(xué)研究提供高質(zhì)量、無疾病的健康動(dòng)物或特殊動(dòng)物。NCRR經(jīng)過50年的發(fā)展,資助開發(fā)了200種26000個(gè)品系的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源,包括:嚙齒類動(dòng)物、非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物、脊椎動(dòng)物、魚類動(dòng)物、生物材料及相關(guān)生物信息等。2011年,由于美國經(jīng)濟(jì)不景氣,NCRR光榮地完成歷史使命,被國家轉(zhuǎn)化科學(xué)促進(jìn)中心(NCATS)替代。
相對(duì)于歐洲而言,美國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用情況并不透明。有人估計(jì)美國每年實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用量在2000萬只以上。美國《動(dòng)物福利法》和《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利法》要求美國農(nóng)業(yè)部定期檢查實(shí)驗(yàn)用貓、狗和非人類靈長(zhǎng)類動(dòng)物的使用情況(不包括嚙齒類動(dòng)物、魚類和鳥類)。美國動(dòng)物福利組織(PETA)在2014年的調(diào)查發(fā)現(xiàn)NIH資助的25個(gè)主要機(jī)構(gòu),實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用量在過去15年間增加了73%,這主要是小鼠、大鼠的使用量。
(1)嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源
嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物包括小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、倉鼠等,是常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,占總數(shù)的90%以上。嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在生命科學(xué)和醫(yī)藥研究中發(fā)揮核心作用,可以轉(zhuǎn)化為人類疾病的治療方法。特別是小鼠,與人類遺傳基因上許多共同之處,常用于開發(fā)、生理、行為、疾病和基因工程技術(shù)等方面研究?;趪X類動(dòng)物模型,科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)了許多重要的生物醫(yī)學(xué)成果,推動(dòng)了人類健康發(fā)展。下表列舉了美國嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源中心(表1)。
表1 美國嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源中心一覽表 | ||
資源單位 | 承擔(dān)機(jī)構(gòu) | 資源種類 |
突變小鼠資源中心(Mutant Mouse Regional Resource Centers) | 包括杰克遜實(shí)驗(yàn)室、密蘇里大學(xué)、加利福尼亞大學(xué)、北卡羅來納大學(xué)等。是一個(gè)信息庫,多個(gè)不同國家的中心的整合信息 | 32776個(gè)小鼠品系,包括活體小鼠3856個(gè),ES細(xì)胞系28920個(gè) |
誘發(fā)突變小鼠資源(Induced Mutant Resource) | 杰克遜實(shí)驗(yàn) | 304種化學(xué)誘變小鼠品系 |
國家無菌嚙齒類動(dòng)物資源中心(National Gnotobiotic Rodent Resource Center) | 北卡羅來納大學(xué) | 無菌、悉生、SPF小鼠、大鼠、斑馬魚等20 多種。小鼠品系包括129S6/SvEv、BALB/C、C57BL/6J、Swiss、CD和部分轉(zhuǎn)基因動(dòng)物 |
鹿鼠遺傳資源中心(Peromyscus Genetic Stock Center) | 南卡羅萊納大學(xué) | 10種野生型鹿鼠和20 種突變型鹿鼠。用于生態(tài)學(xué)、遺傳學(xué)、生物進(jìn)化、疾病和行為學(xué)研究 |
特殊小鼠品系資源(Special Mouse Strains Resource) | 杰克遜實(shí)驗(yàn)室 | 249個(gè)特殊品系,包括重組近交系(199)和染色體置換系(50) |
大鼠資源研究中心(Rat Resource and Research Center) | 包括密蘇里大學(xué)、密歇根大學(xué)和德克薩斯大學(xué)等 | 300多種大鼠品系 |
Cre條件敲除品系資源 | 杰克遜實(shí)驗(yàn)室 | Cre品系,Cre reporter品系,loxPflanked(floxed)品系 |
(2)非人靈長(zhǎng)類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源
非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物是生物醫(yī)學(xué)研究中常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。美國NIH 資助開發(fā)非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物(NHP)人類疾病模型,提供基礎(chǔ)設(shè)施和專業(yè)知識(shí),并促進(jìn)NHP在生物醫(yī)學(xué)研究各個(gè)領(lǐng)域應(yīng)用以及提高動(dòng)物福利等。美國有8個(gè)非人靈長(zhǎng)類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,還有若干實(shí)驗(yàn)基地(表2),其NHP資源。
表2 美國非人靈長(zhǎng)類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源中心一覽表 | |||
資源單位 | 承擔(dān)機(jī)構(gòu) | 資源種類 | 研究領(lǐng)域 |
加利福尼亞國家靈長(zhǎng)類研究中心(California National Primate Research Center) | 加利福尼亞大學(xué) | 5300只恒河猴和56只南美伶猴 | 傳染病、生殖和發(fā)育、神經(jīng)疾病、肺疾病、、認(rèn)知行為等 |
新英格蘭國家靈長(zhǎng)類研究中心(New England National Primate Research Center,注:已關(guān)閉) | 哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院 | 9種1700多只猴,包括1000多只恒河猴,其他舊大陸猴,及新大陸猴,包括狨猴、松鼠猴、絹毛猴 | 艾滋病、癌癥、藥物成癮、精神疾病、神經(jīng)退行性疾病等 |
俄勒岡國家靈長(zhǎng)類研究中心(Oregon National Primate Research Center) | 俄勒岡州大學(xué) | 3800只恒河猴,335只日本雪猴,10只長(zhǎng)尾黑顎猴,9只狒狒和85只食蟹猴 | 生殖和發(fā)育學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、病理學(xué)和免疫學(xué)、代謝性疾病、干細(xì)胞治療、衰老等研究 |
西南國家靈長(zhǎng)類研究中心(Southwest National Primate Research Center) | 西南大學(xué) | 3200只猴,包括1600只狒狒,其他為SPF恒河猴、狨猴和絹毛猴。還有160只黑猩猩 | 慢性疾病、傳染病和生物防御、發(fā)育和老化等 |
圖蘭國家靈長(zhǎng)類研究中心(Tulane National Primate Research Center) | 圖靈大學(xué) | 5000只猴,包括恒河猴、食蟹猴、狒狒(5種)、綠猴、松鼠猴、白眉猴(5種)、赤猴、豚尾猴 | 傳染病和再生醫(yī)學(xué)研究,包括艾滋病、萊姆病、結(jié)核病和生物防御相關(guān)產(chǎn)品 |
華盛頓國家靈長(zhǎng)類研究中心(Washington National Primate Research Center) | 華盛頓大學(xué) | 3000只猴,包括食蟹猴、恒河猴、松鼠猴、豚尾猴 | 艾滋病相關(guān)疾病、系統(tǒng)生物學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、生殖和發(fā)育學(xué)、新發(fā)傳染病等 |
威斯康辛國家靈長(zhǎng)類研究中心(Wisconsin National Primate Research Center) | 威斯康辛大學(xué) | 3000只猴,包括恒河猴、食蟹猴和狨猴 | 全球傳染病(GID)、再生和生殖醫(yī)學(xué)(RRM)、能量代謝和慢性疾?。‥MCD)、神經(jīng)科學(xué) |
耶基斯國家靈長(zhǎng)類研究中心(Yerkes National Primate Research Center) | 耶基斯大學(xué) | 3400只猴,包括恒河猴、白眉猴、松鼠猴、食蟹 猴,還有黑猩猩 | 微生物和免疫學(xué)、神經(jīng)行為學(xué)和精神疾病、發(fā)育和認(rèn)知神經(jīng)科學(xué)、神經(jīng)藥理學(xué)和神經(jīng)疾病 |
加勒比靈長(zhǎng)類動(dòng)物研究中心(CPRC) | 波多黎各大學(xué)醫(yī)學(xué)院 | SPF猴 | 社會(huì)和性行為,群體遺傳學(xué)、生殖生物學(xué)、藥理學(xué)、功能形態(tài)和自發(fā)疾病和恒河猴寄生蟲 |
狒狒研究資源(Baboon Research Resources) | 俄克拉荷馬大學(xué)健康科學(xué)中心 | 不同年齡段的狒狒及SPF狒狒 | 狒狒相關(guān)生物醫(yī)學(xué)、行為學(xué)研究,疾病動(dòng)物模型 |
松鼠猴繁殖和研究資源(Squirrel Monkey Breeding and Research Resource) | 安德森癌癥中心熱帶靈長(zhǎng)類中心 | 450 個(gè)不同年齡段的松鼠猴 | 行為研究、生殖內(nèi)分泌學(xué)、醫(yī)學(xué)靈長(zhǎng)類動(dòng)物學(xué)、遺傳學(xué) |
長(zhǎng)尾黑顎猴研究中心(Vervet Research Colony) | 維克森林大學(xué)醫(yī)學(xué)院 | 每年提供100只長(zhǎng)尾黑顎猴,包括SPF猴 | 代謝性疾病、理學(xué)、生殖生物學(xué)研究 |
(3)其他脊椎和無脊椎動(dòng)物資源
包括酵母、果蠅、線蟲、四膜蟲、海兔、豬、蟾蜍等資源(表3),以及使用這些動(dòng)物開發(fā)的動(dòng)物模型、基因工程動(dòng)物、干細(xì)胞、細(xì)胞系或遺傳資源、計(jì)算機(jī)建模等。
表3 美國無脊椎實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源中心一覽表 | ||
資源單位 | 承擔(dān)機(jī)構(gòu) | 資源種類 |
果蠅資源中心(Bloomington Drosophila Stock Center) | 印第安納大學(xué) | 果蠅41000個(gè)品系 |
果蠅基因組學(xué)資源中心(DGRC) | 印第安納大學(xué) | 100萬以上的細(xì)胞克隆 |
線蟲遺傳資源中心(Caenorhabditis Genetics Center,CGC) | 明尼蘇達(dá)大學(xué)、愛因斯坦醫(yī)學(xué)院 | 線蟲11273株 |
國家海兔資源中心(National Resource for Aplysia) | 邁阿密大學(xué) | 海兔10000多個(gè) |
國家嗜熱四膜蟲資源中心(National Resource for Cephalopods) | 康奈爾大學(xué) | 多種嗜熱四膜蟲 |
國家豬資源研究中心(National Swine Resource & Research Center) | 密蘇里大學(xué) | 杜洛克、長(zhǎng)白豬等10個(gè)品系和16個(gè)轉(zhuǎn)基因品系。 |
國家蟾蜍資源中心(National Xenopus Resource Center | 海洋生物研究所 | 25個(gè)非洲爪蟾品系,提供近交系、突變系和轉(zhuǎn)基因爪蟾。 |
(4)水生實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源
包括斑馬魚、其他魚類、海洋鼻涕蟲等水生動(dòng)物、疾病模型和相關(guān)生物材料。水生實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生殖周期短,卵透明,常用于發(fā)育生物學(xué)、行為學(xué)、人類疾病和功能基因組學(xué)研究。俄勒岡州大學(xué)斑馬魚國際資源中心擁有斑馬魚13161個(gè)品系。德克薩斯州大學(xué)的劍尾魚遺傳資源中心擁有劍尾魚23種,65個(gè)品系。
(5)其他資源
美國其他生物材料資源中心,包括基因分析資源、信息資源、獸醫(yī)資源與試劑、生物材料資源等。德州農(nóng)工大學(xué)醫(yī)藥學(xué)院健康科學(xué)中心再生醫(yī)學(xué)研究所擁有數(shù)千種成人間充質(zhì)干細(xì)胞資源。美國疾病研究交換所(NDRI)擁有人體組織和器官資源,每年提供4000多份樣本給癌癥、傳染病、心臟病、毒理和等研究機(jī)構(gòu)。德州農(nóng)工大學(xué)Kingsville 自然毒素研究中心構(gòu)建了毒蛇資源中心,擁有29種450多條毒蛇,提供蛇的毒液、腺體、皮膚、血液和器官用于毒物研究。
美國的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源在美國國內(nèi)實(shí)現(xiàn)了很高程度的共享,同時(shí)也輻射到了歐洲。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源研究一直是發(fā)達(dá)國家的關(guān)注的重點(diǎn)之一,不僅有研制、培育途徑,還有購買、引進(jìn)或掠奪等多種途徑;不僅作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源,也作為物種資源加以保存、培育和利用;對(duì)生命科學(xué)、醫(yī)藥等起到了極大的支持作用。而歐洲采用多國合作、集中研制的形式,也在基因工程動(dòng)物資源方面占領(lǐng)了一席之地。以英國劍橋大學(xué)Sanger研究所牽頭,德國和美國參與,總投入2億英鎊左右,建立了新一代的基因工程修飾小鼠胚胎干細(xì)胞資源庫。采用集中大規(guī)模研制模式,目前劍橋大學(xué)Sanger研究所已經(jīng)有近20000種新一代基因敲除小鼠胚胎干細(xì)胞庫。其大規(guī)模、高效率的研究模式,具中國效仿價(jià)值。
國外實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量控制級(jí)別越來越高,規(guī)模化生產(chǎn)便于實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量控制。近交系、SPF級(jí)、基因工程動(dòng)物等數(shù)量逐漸增加,普通動(dòng)物越來越少。由于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)和供應(yīng)方面產(chǎn)業(yè)化程度較高,為了保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量,在競(jìng)爭(zhēng)激烈的市場(chǎng)上處于有利位置,各個(gè)企業(yè)都制訂有自己的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。比如大的實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠商品化生產(chǎn)、銷售公司——Charles River制定的標(biāo)準(zhǔn)在全球?qū)嶒?yàn)動(dòng)物領(lǐng)域內(nèi)得到基本認(rèn)同,具有一定的代表性。以英國劍橋大學(xué)桑格研究所牽頭,德國和美國參與,總投入兩億英鎊左右,建立了新一代的基因工程修飾小鼠胚胎干細(xì)胞資源庫,在未來幾年內(nèi)將完成兩萬以上基因敲除。
其中,英國是目前世界上實(shí)驗(yàn)動(dòng)物統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)最準(zhǔn)確的國家之一。1940年只有約100萬只動(dòng)物用于科學(xué)研究,但1960年的數(shù)量增加到350萬只,1971年達(dá)到560萬只,幾年后仍然保持在550萬只左右。自1980年以來,這一數(shù)字顯著下降,2001年降至262萬,不到1970年使用量的一半。近年來,英國的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量有所增加,在2012年增加到411萬,比2001年增加了57%。越來越多的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用量帶給時(shí)任英國首相大衛(wèi)卡梅倫聯(lián)合政府很大的壓力(2010-2016)。
根據(jù)用于科學(xué)研究的動(dòng)物物種紀(jì)錄,超過70%的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是嚙齒動(dòng)物。2000年,英國五大廣泛使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是小鼠、大鼠、魚類、鳥類和豚鼠,分別占總數(shù)的59.2%、19.7%、9.0%、4.6%和2.6%。2001年,嚙齒動(dòng)物占英國研究動(dòng)物的82%;魚、兩棲動(dòng)物、爬行動(dòng)物和鳥類占14%;小型哺乳動(dòng)物(嚙齒動(dòng)物除外)占2.3%;大型哺乳動(dòng)物占1.3%;狗貓占0.4%;和非人類靈長(zhǎng)類動(dòng)物占0.1%。2014年,常用的動(dòng)物是小鼠、魚類、大鼠、鳥類、其他動(dòng)物和受特別保護(hù)的動(dòng)物,分別占總數(shù)的60%、14%、12%、7%、6%和1%。
由2016年英國使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物物種統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)(Annual Statistics of Scientific Procedures on Living Animals Great Britain,2016)顯示,英國共使用了393.6萬只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(表1.3-1)。其中,使用最多的為小鼠約72.8%(286.6萬只),其次為魚類約13.6%(53.5萬只),之后依序?yàn)榇笫蠹s6.3%(24.9萬只)、鳥類約3.8%(15.1萬只)、其它約3%(13.3萬只),另外受特別保護(hù)的物種(specially protected species)的使用,主要是馬(8900個(gè)計(jì)劃)、狗(4,900個(gè)計(jì)劃)、非人類靈長(zhǎng)類動(dòng)物(3600個(gè)計(jì)劃)和貓(190個(gè)計(jì)劃)。比較2016年和2015年的物種,在使用數(shù)量上有顯著變化,除了豚鼠(guinea pigs)增加20%(4400只)至26000只(與2014年數(shù)量相當(dāng)),家禽增加9%(12000只)至138000只,兔子增加9%(1300只)至15000只,綿羊增加3%(1300只)至48000只外;其它動(dòng)物如大鼠,則減少7%(19000只)至239000只,與2014年的數(shù)字相當(dāng),小鼠則減少4%(49000只)至122萬只;在魚類總體減少2%(7000只)至287000只,其中斑馬魚使用的數(shù)量增加了28%(42000只),“其他魚類”的使用則減少了34%(49000只)。
值得注意的是,從2007年至2016年在英國前三大使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(小鼠、大鼠及魚類)使用數(shù)量變化,顯示英國在3Rs觀念的倡導(dǎo)下,此三種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用數(shù)量確實(shí)有逐年減少的趨勢(shì)(圖 1)
圖1 2007年至2016年英國使用小鼠、大鼠和魚類作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量的變化
資料來源:Annual Statistics of Scientific Procedures on Living Animals Great Britain,2016
另外,分析實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)其遺傳的狀態(tài)為基因改變動(dòng)物(genetically altered animals)或非基因改變動(dòng)物(not genetically altered animals)的比例,顯示2016年在英國約有729000個(gè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物涉及改變基因,此數(shù)量比2015年增加1%(9600只),持續(xù)過去9年的增長(zhǎng)趨勢(shì)。且較2007年以來使用改變基因動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)研究的數(shù)目增加了36%(194,000只)。相反的,沒有涉及遺傳改變的動(dòng)物的數(shù)量自2015年至2016年期間下降了5%至129萬只,繼續(xù)呈下降趨勢(shì),若從2008年高峰的165萬只計(jì)算則大約減少21.8%(圖2)。
圖 2 2007年至2016年,英國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),其遺傳的狀態(tài)(基因改變過或未經(jīng)過基因改變)
資料來源:Annual Statistics of Scientific Procedures on Living Animals Great Britain,2016
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