手機版
化工儀器網手機版
化工儀器網小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
PCR是一種能夠在短時間內將單個DNA分子擴增數百萬倍的生化過程。其擴增過程包括三個連續(xù)步驟：變性，對雙鏈DNA模板進行加熱，使其解離；退火，被稱為引物的短DNA分子與目標DNA的側翼區(qū)域結合；延伸，DNA聚合酶沿著模板鏈將引物3’端進行延伸。多年以來，PCR的基本原理一直未變，但隨著 DNA聚合酶和試劑性能的大幅提升，以及儀器和塑料反應管的不斷創(chuàng)新，PCR實驗方法也在不斷改進。那么你知道PCR實驗的七大要素嗎？讓我們一起來看看吧！
一、DNA聚合酶
DNA聚合酶是PCR的重要組成部分，它們能夠從單鏈DNA模板合成新的互補鏈。所有DNA聚合酶都具有5′→ 3′聚合酶活性，即摻入核苷酸并使引物從按5'至3’方向延伸。
早期的PCR，通常使用來源于 大腸桿菌 的DNA聚合酶I上的 Klenow片段 來生成新的子鏈。但是，這種 大腸桿菌酶對熱敏感，易受到變性階段高溫度的破壞，從而無法繼續(xù)進行退火和延伸步驟。因此，需要在全程每個循環(huán)的退火步驟中重新補充酶。
二、熱循環(huán)儀
熱循環(huán)儀是一種能夠為PCR反應自動完成溫度循環(huán)和孵育的儀器。在引入熱循環(huán)儀之前，PCR反應是一個費時費力的過程，需在不同溫度的水浴之間轉移樣品，并為每個步驟需要精確定時。
三、模板DNA
用于復制的PCR模板可以是任何DNA來源，如基因組DNA(gDNA)、互補DNA(cDNA)和質粒DNA。
四、引物
PCR引物是含有15-30個堿基的合成DNA寡核苷酸。能夠與模板DNA中目標區(qū)域的側翼序列結合(通過序列互補)。在PCR反應期間，DNA聚合酶從 3′端開始延伸引物。因此，引物結合位點必須是靶標附近所有的，并且與起始DNA的其它部分序列具有最小的同源性，以確保目的片段的特異性擴增。
五、脫氧核苷三磷酸(dNTP)
dNTP由四個基本核苷酸組成——dATP、dCTP、dGTP和dTTP——是新DNA鏈的組成元件。這四種核苷酸通常以相等摩爾量加入到PCR反應體系中，以實現(xiàn)最佳的堿基引入。但是，在某些情況下，如通過PCR方法進行隨機突變，偶爾也會使用濃度不等的dNTP，以促進非校正DNA聚合酶產生更多的錯誤堿基插入。
六、鎂離子(Mg2+ )
鎂離子(Mg2+ )作為DNA聚合酶活性的輔助因子，有助于聚合期間dNTP的結合。酶活性位點處的鎂離子可催化引物的3′-OH與dNTP的磷酸基團間形成磷酸二酯鍵。此外， Mg2+ 能夠穩(wěn)定磷酸鹽骨架上的負電荷，從而促進引物與DNA模板形成復合物
七、緩沖液
PCR緩沖液能夠為DNA聚合酶活性提供適宜的化學環(huán)境。緩沖液pH通常為8.0-9.5，一般使用Tris-HCl來調節(jié)。
更多有關PCR實驗的七大要素，請聯(lián)系北京百奧創(chuàng)新科技有限公司。
免責聲明
- 凡本網注明“來源：化工儀器網”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品，未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的，應在授權范圍內使用，并注明“來源：化工儀器網”。違反上述聲明者，本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源（非化工儀器網）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時，必須保留本網注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內與本網聯(lián)系，否則視為放棄相關權利。
采購中心