Octet® 非標(biāo)記分子互作分析系統(tǒng)采用實(shí)時(shí)的非標(biāo)記分析技術(shù)，用于測(cè)定親和力、動(dòng)力學(xué)和抗體/蛋白質(zhì)定量。這種無流路的儀器平臺(tái)基于生物層干涉（BLI）技術(shù)而設(shè)計(jì)，與傳統(tǒng)的非標(biāo)記技術(shù)相比，具有眾多優(yōu)勢(shì)。

2024年上半年（截至6月30日在線發(fā)表）的國內(nèi)論文中，使用賽多利斯Octet® 數(shù)據(jù)的國內(nèi)論文呈現(xiàn)井噴狀態(tài)。陳老師統(tǒng)計(jì)了2024年上半年約200篇國內(nèi)論文（預(yù)計(jì)總數(shù)超過200篇），這些文章分布于130個(gè)單位， 詳細(xì)列表在文末哦~老規(guī)矩，讓我們先按照單位和應(yīng)用進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

圖1. 2024上半年Octet® 文章第一作者單位分布

圖2. 2024H1 Octet® 文章應(yīng)用分布

今天，我們就來挑選幾篇代表性文章來一一解讀：

全球氣候變化伴隨著二氧化碳（CO₂）富集和高溫（HT）脅迫。研究發(fā)現(xiàn)，番茄外源質(zhì)外糖 （Glc）處理增強(qiáng)了番茄在環(huán)境CO₂條件下對(duì)HT脅迫的恢復(fù)力。基于細(xì)胞的生物層干涉法（Octet® ）、亞細(xì)胞定位和分裂熒光素酶測(cè)定表明，Glc 與番茄 G 蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 1 （RGS1） 調(diào)節(jié)因子結(jié)合并誘導(dǎo) RGS1 內(nèi)吞作用，從而以濃度依賴性方式誘導(dǎo) RGS1-G 蛋白α亞基 （GPA1） 解離，這是 CO₂-Glc 誘導(dǎo)的耐熱性升高所必需的。這些信息增強(qiáng)了對(duì)Glc-G蛋白信號(hào)傳導(dǎo)功能在應(yīng)對(duì)全球氣候變化的脅迫恢復(fù)力中的理解，并將有助于開發(fā)植物恢復(fù)力的基因工程方法。

圖3. 將原生質(zhì)體固化在Octet® 傳感器上，結(jié)合各種單糖，發(fā)現(xiàn)表達(dá)RGS1的細(xì)胞主要結(jié)合葡萄糖，但是將RGS1突變后，與葡萄糖結(jié)合變?nèi)?/p>

Octet® 因?yàn)榻爰醋x的方法，更適合檢測(cè)比較大的分析物，比較細(xì)胞。

第三劑滅活新型冠狀病毒疫苗的抗體反應(yīng)對(duì)疫苗的保護(hù)作用至關(guān)重要。西湖大學(xué)工學(xué)院對(duì)接種疫苗的15人的九個(gè)月里七個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行了微量取樣和靜脈穿刺取樣，并建立了基于Octet® 的光纖生物層干涉法測(cè)量(FO-BLI)來測(cè)試血清中的中和抗體，可以在幾分鐘內(nèi)完成測(cè)試。研究結(jié)果揭示發(fā)現(xiàn)在第三次給藥后，野生型變體的血清NAb水平在7天后增加了2.9倍，在一個(gè)月內(nèi)增加了3.3倍，隨后下降，并在三個(gè)月后變得不可檢測(cè)。針對(duì)原始株與變異株的中和能力檢測(cè), FO-BLI與假病毒中和試驗(yàn)高度相關(guān)(Pearson 相關(guān)系數(shù)為0.983)。基于FO-BLI的濃度測(cè)試因?yàn)槠淇焖?，并且與功能性匹配，有潛力在疾病預(yù)防和疫苗開發(fā)中有著更大的應(yīng)用。

圖4. A圖：Octet® 建立血清中和抗體的檢測(cè)方法，將受體ACE2結(jié)合在傳感器上，與HRP偶聯(lián)的不同病毒株的RBD和血清的混合物孵育，然后用底物放大信號(hào)；B圖：這種方法測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)抗體的靈敏度可以達(dá)到20ng/mL；

D圖：FO-BLI的檢測(cè)結(jié)果與病毒中和實(shí)驗(yàn)PVNT（IC50）有良好的相關(guān)性

使用生物層干涉技術(shù)，可以快速建立濃度檢測(cè)方法。

研究者建立了一種基于Octet® 的垂釣技術(shù)，研究人員將GNAS蛋白固化至SA傳感器表面，再與中藥參芪降糖顆粒（SJG）提取物結(jié)合，隨后提取物被解離至洗脫液中，將洗脫液使用UHPLC-Q/TOF-MS/MS分析GNAS垂釣出的小分子。通過垂釣組與對(duì)照組的相對(duì)含量變化篩選26個(gè)小分子可能與GNAS有相互作用。其中7個(gè)化合物用Octet® 進(jìn)一步驗(yàn)證，并顯示出強(qiáng)的結(jié)合活性，均是SJG的主要成分。其中，黃芪中的Formononetin、高麗參的三七皂苷Ft1和人參皂苷中的甲素人參F2為“君“、地黃中的Catapol為“臣”，五味子中的五味子素A和茜草中的沒食子酸為“佐使”，符合中醫(yī)配伍“君臣佐使“原則。

圖5. Octet® 驗(yàn)證小分子和GNAS的結(jié)合

非流路設(shè)計(jì)可以多次垂釣富集豐度低結(jié)合弱的小分子，提高垂釣的成功率。

肝細(xì)胞對(duì)預(yù)防非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD）和其他慢性代謝性疾病具有重要意義。中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所黃波團(tuán)隊(duì)研究發(fā)現(xiàn)，糖原合成使用其中間代謝物尿苷二磷酸葡萄糖（UDPG）來拮抗脂肪生成，從而引導(dǎo)小鼠和人肝細(xì)胞將葡萄糖碳儲(chǔ)存為糖原。在這項(xiàng)機(jī)制研究中，發(fā)現(xiàn)UDPG通過SLC35F5轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入高爾基體后，誘導(dǎo)site-1蛋白酶S1P的泛素化降解，從而阻斷活性形式SREBP1c的生成，最終抑制脂肪酸的合成。通過Octet® 非標(biāo)記分子互作系統(tǒng)對(duì)小鼠和人的脂肪酸合成過程中關(guān)鍵酶（S1P）與UDPG結(jié)合這一重要步驟進(jìn)行了驗(yàn)證，并提供了結(jié)合的直觀證據(jù)。

圖6. 通過SA傳感器固化小鼠（a）和人（b）的S1P蛋白分別與不同濃度UDPG結(jié)合解離曲線

原文大量pulldown以及CO-IP數(shù)據(jù)，但作者仍選擇用Octet® 非標(biāo)記互作系統(tǒng)來證明S1P與UDPG直接相互作用，可見Direct Binding是趨勢(shì)。

Octet®分子互作分析系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)在于

Octet® 讓分子互作不再復(fù)雜！祝愿大家可以用賽多利斯神器發(fā)好文章！