納米顆粒跟蹤分析 (NTA, Nanoparticle Tracking Analysis) 是一種通過跟蹤并分析單個納米顆粒的布朗運動來測量粒徑和濃度的技術。盡管NTA能夠提供納米顆粒的粒徑分布和濃度信息，但由于以下原因，它無法提供傳統(tǒng)意義上的LOD：

NTA依賴于光散射來檢測顆粒，而不同顆粒的散射強度差異較大，尤其是在樣品中存在多分散性時，大顆粒散射光強往往將小顆粒信號遮擋，導致粒徑偏大，濃度偏低。因此，不同粒徑的顆粒可能會產(chǎn)生不同的信號強度，使得定義一個統(tǒng)一的LOD變得困難。

2、顆粒濃度影響：

NTA的檢測范圍受到顆粒濃度的限制。濃度過高時，大小顆粒之間的相互干擾會導致分析不準確；濃度過低時，無法檢測到足夠數(shù)量的顆粒亦會造成取樣誤差和隨機誤差（。因此，很難確定一個適用于所有樣品的低濃度檢測限（不同的樣本的LOD會有所不同）。同時，即便是純化后的細胞外囊泡這類明確的樣本其線性濃度區(qū)間也通常只能集中于一個數(shù)量級^[1][2]。

3、光學系統(tǒng)的限制：

NTA的檢測靈敏度還取決于光學系統(tǒng)的分辨能力以及參數(shù)設定，特別是在檢測小尺寸的納米顆粒時。光學分辨能力的局限使得難以為NTA技術定義一個統(tǒng)一的LOD。

由于這些因素，NTA在粒徑和濃度表征種提供的是一種相對定量的結果，而非絕對的低檢測限。

動態(tài)光散射 (DLS，Dynamic Light Scattering) 本質上是一種用于測量懸浮液中納米顆?；虼蠓肿拥臄M合粒徑的方法。由于DLS依賴于顆粒散射光的強度，同樣的，在確定檢測限LOD上通常具有一定的局限性：

1、散射強度的依賴性：

DLS測量的是樣品中所有顆粒的平均布朗運動，因此，較小的顆?；蛘叩蜐舛鹊念w粒產(chǎn)生的散射信號可能被背景噪聲淹沒，難以準確檢測。一般來說，DLS的LOD對于顆粒濃度和粒徑范圍的要求要比人們通常理解的要高。

2、多分散性和濃度影響：

在多分散體系或濃度過低的樣品中，DLS難以區(qū)分各個不同大小的顆粒，因此難以準確給出一個統(tǒng)一的LOD。具體來說，DLS的原理假設樣本都是單分散大小分布的（PDI<0.1甚至要更?。?，而對于多分散的（例如大多數(shù)生物樣本）并不適合；另外雖然DLS原理并不能計算濃度數(shù)據(jù)，但是DLS測樣對濃度卻是有要求的，不合適的上樣濃度會導致粒徑上的巨大偏差，也容易被人忽視。

瑞芯智造NanoCoulter納米庫爾特粒度儀應用RPS技術，打破光學原理的局限性，經(jīng)過十余年微納加工技術沉淀，創(chuàng)新光刻硅基固體納米孔芯片，將經(jīng)典庫爾特技術的粒徑檢測范圍從微米級下探至納米級。同時依賴高靈敏皮安級電流檢測和信號噪音的分析處理可精準降噪分析每個過孔顆粒，真正意義上的單顆粒檢測，可精確分析粒徑分布廣的多分散樣本，具備更寬的粒徑LOD (15-2000 nm) 和極寬的濃度LOD (10⁶-10¹² particles/mL)。

參考文獻

[1] Welsh JA, Goberdhan DCI, O'Driscoll L, et al. Minimal information for studies of extracellular vesicles (MISEV2023): From basic to advanced approaches [published correction appears in J Extracell Vesicles. 2024 May;13(5):e12451. doi: 10.1002/jev2.12451]. J Extracell Vesicles. 2024;13(2):e12404.

[2] Li Y, Zhang S, Liu C, et al. Thermophoretic glycan profiling of extracellular vesicles for triple-negative breast cancer management. Nat Commun. 2024;15(1):2292.

[3] Tian Y, Tian D, Peng X, Qiu H. Critical parameters to standardize the size and concentration determination of nanomaterials by nanoparticle tracking analysis. Int J Pharm. 2024;656:124097.