在完成了小鼠淋巴瘤細(xì)胞EL4的基本準(zhǔn)備與復(fù)蘇步驟后，接下來(lái)是細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵階段。首先，將復(fù)蘇后的EL4細(xì)胞懸液輕輕吹打均勻，以避免細(xì)胞團(tuán)塊的形成，這有助于細(xì)胞在培養(yǎng)環(huán)境中的均勻分布和生長(zhǎng)。隨后，使用臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè)細(xì)胞活力，確保大部分細(xì)胞保持活性，為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)提供可靠的細(xì)胞基礎(chǔ)。

     接著，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求調(diào)整細(xì)胞密度，通常將細(xì)胞懸液稀釋至適宜的濃度后，接種至預(yù)先準(zhǔn)備好的含有培養(yǎng)基（包括RPMI-1640培養(yǎng)基、10%胎牛血清、雙抗等）的培養(yǎng)瓶中。注意在接種過(guò)程中避免產(chǎn)生氣泡，氣泡可能會(huì)干擾細(xì)胞貼壁或造成培養(yǎng)基分布不均。

    培養(yǎng)瓶置于37℃、5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，這是維持EL4細(xì)胞正常生長(zhǎng)代謝的必要條件。每日需觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，包括形態(tài)、密度及培養(yǎng)基的顏色變化，以判斷是否需要更換新鮮培養(yǎng)基或進(jìn)行傳代培養(yǎng)。一般而言，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%時(shí)，應(yīng)進(jìn)行傳代操作，以避免細(xì)胞因過(guò)度生長(zhǎng)而衰老或死亡。

    在傳代時(shí)，首先輕輕吸去舊培養(yǎng)基，加入適量PBS緩沖液洗滌細(xì)胞表面，去除殘留的培養(yǎng)基和死細(xì)胞。然后，加入適量胰酶進(jìn)行消化，待細(xì)胞邊緣變圓、輕輕搖晃即可脫落時(shí)，立即加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。通過(guò)輕柔吹打使細(xì)胞分散成單細(xì)胞懸液，并按需進(jìn)行傳代接種或收集細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

     通過(guò)精心細(xì)致的操作和持續(xù)的觀察，可以確保EL4細(xì)胞在體外培養(yǎng)過(guò)程中保持穩(wěn)定的生長(zhǎng)狀態(tài)，為后續(xù)的科學(xué)研究提供可靠的細(xì)胞模型。