抗體(antibody,Ab)是機體在體內存在的外來分子、微生物等抗原物質刺激下,由B淋巴細胞或記憶細胞增殖分化成的漿細胞所產(chǎn)生的、可與相應抗原發(fā)生特異性結合的免疫球蛋白(immunoglobulins,Ig),主要分布在血清中,也分布于組織液及外分泌液中。
抗體保存得當與否,直接決定了抗體的活性和使用效果!如果抗體保存得當,大部分抗體活性都可以維持數(shù)月甚至數(shù)年。請謹記無論何時請按照說明書推薦的保存條件正確保存抗體.
一、一般抗體的保存方法
1. 收到抗體后請務必在 12000rpm 離心 1-5 分鐘后再打開管蓋進行分裝和保存(如果抗體體積小于50ul,請延長離心時間至 5 分鐘,以保證全部抗體均離心下來)!
2. 對于大部分抗體,比較合適的保存方式是分裝后保存在-20℃或-80℃。
對絕大多數(shù)抗體來說,保存在-20℃是全足夠了。沒有任何證據(jù)顯示保存在-80℃會有更多的好處!
分裝可以大程度的降低反復凍融對抗體活性的損害,同時也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。分裝的量以一次實驗用完為好,最少不能少于 10ul每份。因為分裝體積越小,抗體的濃度越可能會受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。復融后的分裝抗體如果一次用不完,將剩余母液保存在4℃,避免再凍起來!抗體工作液應該當天配制當天用完,在4℃盡量不要超過1天。絕對避免將抗體保存在自動除霜冰箱中。盡量將抗體保存在冰箱里層,而不是門上。
3. 大部分抗體收到后 4℃短暫保存1-2周對抗體活性是沒有影響的。
如果抗體很快(1-2 周)會使用,推薦在4℃保存,這是為了避免反復凍融對抗體活性的損害。如果要長期保存則最好是在-20℃ or -80℃。最關鍵的一點是要根據(jù)說明書推薦的方式來正確的保存抗體!
但是,腹水形式的產(chǎn)品請在收到后立即凍起來!因為該類產(chǎn)品含有大量的蛋白酶,長期在4℃保存會導致抗體的降解!
4. 大部分抗體的運輸條件:一般的運輸過程需要1-2周的時間,所以是在4℃的條件下來完成的。4℃運輸最主要的目的是為了避免反復凍融對抗體活性的損害(如果使用干冰運輸,那么收到時抗體是凍起來的,為了分裝就需要解凍。這就多了一次凍融的過程)。 所以運輸過程中絕對避免干冰運輸!
二、特殊抗體的保存條件:
1.酶聯(lián)抗體:永遠保存在 4℃,避免凍起來。否則會導致酶活性的下降或者喪失。
2.偶聯(lián)抗體:所有偶聯(lián)抗體都需要在棕色管中或使用錫箔紙避光4℃保存。尤其是熒光抗體,對光極為敏感,因此在所有的實驗階段也是要避光操作的!
3.IgG3 的同型對照:永遠保存在4℃,避免凍起來。因為如果出現(xiàn)凍融過程,該抗體非常容易形成多聚體(無論是保存還是運輸,絕對避免反復凍融),反復凍融會導致抗體變性,導致多聚體形成,從而降低抗體的結合能力!
三、抗體保存其它相關信息:
1.關于加入甘油保存:
有些人會加 50%的甘油到抗體中來避免反復凍融,甘油在-20℃會降低冰點。這對很多抗體可能是可行的。加入甘油的溶液不建議在-80℃保存,因為這已經(jīng)超過了甘油的冰點。如果您要加入甘油來保存抗體的話,請謹慎注意無菌操作,避免污染!
2.關于蛋白保護劑:
蛋白在高濃度時更不容易降解(1 mg/ml 或者更高),這就是為什么在抗體中加入 BSA 之類作為穩(wěn)定劑的原因了;另一方面,加入的蛋白也可以減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標記的話,則不能加入蛋白穩(wěn)定劑,因為這些穩(wěn)定劑會和抗體一起競爭結合標記物。
關于NaN3(sodium azide)的使用:
3.為了防止微生物污染,NaN3經(jīng)常被加入到抗體中(終濃度 0.02% (w/v))。NaN3
在下述情況中不能使用NaN3:
(1)如果抗體用于染色或處理活細胞,用于體內研究:
(2)NaN3在抵抗微生物的同時,對其它大部分有機物也是有毒的, 因為它阻斷了線粒體的 cytochrome electron transportsystem.
(3)要偶聯(lián)帶有氨基基團的抗體:NaN3會干擾任何含有氨基基團的偶聯(lián),因此在進行偶聯(lián)之前,應將NaN3去除。偶聯(lián)后的抗體可以加入NaN3保存,但是濃度只能是0.01%。對于需要偶聯(lián)的抗體,thimerosal (merthiolate)可以替代NaN3作為保護劑!
4.NaN3的去除方式:
可以通過凝膠電泳或過濾的方式去除!IgG 的分子量是 150kDa (IgM 是~ 600kDa); NaN3的分子量只有65Da。使用 cut off 14kDa 的濾膜即可將NaN3從抗體中去除。
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