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二胺氧化酶(DAO)活性檢測試劑盒（可見分光光度法）
產(chǎn)品貨號：BA1089
產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣
產(chǎn)品簡介：
DAO(EC1.4.3.6)廣泛存在于動物（腸粘膜、肺、肝臟、腎臟等）、植物和微生物中。催化多胺氧化為醛，其活性與核酸和蛋白合成密切相關(guān)，能夠反映腸道機械屏障的完整性和受損傷程度。
DAO催化尸胺產(chǎn)生醛和過氧化氫，外源添加過量的辣根過氧化物酶，催化過氧化氫氧化鄰聯(lián)茴香胺生成有色物質(zhì)，在500nm處有特征吸收峰，通過測定該波長吸光度增加速率，計算DAO活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測。
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60mL×1瓶 | 2-8℃ |
試劑一 | 液體0.6mL×1支 | 2-8℃ |
試劑二 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃ |
試劑三 | 液體1.5mL×1瓶 | 2-8℃ |
溶液的配制：
試劑二：液體置于試劑瓶內(nèi)玻璃瓶中。臨用前加入6mL蒸餾水溶解，4℃可保存1個月。
需自備的儀器和用品：
天平、低溫離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、蒸餾水、無水乙醇、研缽/勻漿器、水浴鍋。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃離心20min，取上清，置冰上待測。
2. 細(xì)菌、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體：直接測定。
二、測定操作表：
1. 分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至500nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 操作表
試劑名稱（mL） | 對照管 | 測定管 |
樣本 | 0.25 | 0.25 |
提取液 | 0.59 | 0.59 |
試劑一 | 0.01 | 0.01 |
試劑二 | 0.1 | 0.1 |
試劑三 | - | 0.05 |
無水乙醇 | 0.05 | - |
混勻，37℃水浴30min后于1mL玻璃比色皿中測定500nm下吸光度，ΔA=A測定-A 對照。 | ||
三、酶活性計算公式：
1. 組織DAO活力的計算
（1）按蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個酶活力單位。
DAO（U/mg prot）=ΔA÷d÷ε×V反總÷(cpr×V樣本)÷T=18×ΔA÷cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個酶活力單位。
DAO（U/g 鮮重）=ΔA÷d÷ε×V反總÷(W÷V提取×V樣本)÷T=18×ΔA÷W
2. 血清（漿）DAO活力的計算
單位的定義：每mL血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個酶活力單位。
DAO（U/mL）=ΔA÷d÷ε×V反總÷V樣本÷T=18×ΔA
3. 按細(xì)胞數(shù)量計算：
單位的定義：每104個細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個酶活力單位。
DAO活性（U/104cell）=ΔA÷d÷ε×V反總÷（500×V樣÷V提?。?/span>÷T= 0.036×ΔA
V反總：反應(yīng)總體積，1mL；V樣本：加入樣本的體積，0.25mL；V提取，加入提取液體積，1mL；cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；d：1mL玻璃比色皿光徑，1cm；ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺消光系數(shù)，7.5×10-3mL/μmol/cm；T：反應(yīng)時間，30min；500：細(xì)胞總數(shù)，500萬。
注意事項：
1. 如果ΔA小于0.01，適當(dāng)加大提取用樣本質(zhì)量；ΔA大于0.8，樣本可用提取液適當(dāng)稀釋，或者減少提取用樣本質(zhì)量。
2. 樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測定。
二胺氧化酶(DAO)活性檢測試劑盒（可見分光光度法）
產(chǎn)品貨號：BA1089
產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣
產(chǎn)品簡介：
DAO(EC1.4.3.6)廣泛存在于動物（腸粘膜、肺、肝臟、腎臟等）、植物和微生物中。催化多胺氧化為醛，其活性與核酸和蛋白合成密切相關(guān)，能夠反映腸道機械屏障的完整性和受損傷程度。
DAO催化尸胺產(chǎn)生醛和過氧化氫，外源添加過量的辣根過氧化物酶，催化過氧化氫氧化鄰聯(lián)茴香胺生成有色物質(zhì)，在500nm處有特征吸收峰，通過測定該波長吸光度增加速率，計算DAO活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測。
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60mL×1瓶 | 2-8℃ |
試劑一 | 液體0.6mL×1支 | 2-8℃ |
試劑二 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃ |
試劑三 | 液體1.5mL×1瓶 | 2-8℃ |
溶液的配制：
試劑二：液體置于試劑瓶內(nèi)玻璃瓶中。臨用前加入6mL蒸餾水溶解，4℃可保存1個月。
需自備的儀器和用品：
天平、低溫離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、蒸餾水、無水乙醇、研缽/勻漿器、水浴鍋。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃離心20min，取上清，置冰上待測。
2. 細(xì)菌、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體：直接測定。
二、測定操作表：
1. 分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至500nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 操作表
試劑名稱（mL） | 對照管 | 測定管 |
樣本 | 0.25 | 0.25 |
提取液 | 0.59 | 0.59 |
試劑一 | 0.01 | 0.01 |
試劑二 | 0.1 | 0.1 |
試劑三 | - | 0.05 |
無水乙醇 | 0.05 | - |
混勻，37℃水浴30min后于1mL玻璃比色皿中測定500nm下吸光度，ΔA=A測定-A 對照。 | ||
三、酶活性計算公式：
1. 組織DAO活力的計算
（1）按蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個酶活力單位。
DAO（U/mg prot）=ΔA÷d÷ε×V反總÷(cpr×V樣本)÷T=18×ΔA÷cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個酶活力單位。
DAO（U/g 鮮重）=ΔA÷d÷ε×V反總÷(W÷V提取×V樣本)÷T=18×ΔA÷W
2. 血清（漿）DAO活力的計算
單位的定義：每mL血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個酶活力單位。
DAO（U/mL）=ΔA÷d÷ε×V反總÷V樣本÷T=18×ΔA
3. 按細(xì)胞數(shù)量計算：
單位的定義：每104個細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個酶活力單位。
DAO活性（U/104cell）=ΔA÷d÷ε×V反總÷（500×V樣÷V提?。?/span>÷T= 0.036×ΔA
V反總：反應(yīng)總體積，1mL；V樣本：加入樣本的體積，0.25mL；V提取，加入提取液體積，1mL；cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；d：1mL玻璃比色皿光徑，1cm；ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺消光系數(shù)，7.5×10-3mL/μmol/cm；T：反應(yīng)時間，30min；500：細(xì)胞總數(shù)，500萬。
注意事項：
1. 如果ΔA小于0.01，適當(dāng)加大提取用樣本質(zhì)量；ΔA大于0.8，樣本可用提取液適當(dāng)稀釋，或者減少提取用樣本質(zhì)量。
2. 樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測定。
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