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          使用蛋白 A/G 磁珠進(jìn)行抗體純化的步驟與技巧

          來源:MedChemExpress LLC   2024年11月04日 18:14  
             蛋白 A/G 磁珠是一種常用的抗體純化工具,其通過特異性結(jié)合抗體的Fc段,實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)抗體的高效富集和純化。
           
            一、準(zhǔn)備工作
            材料準(zhǔn)備
            蛋白 A/G 磁珠
            待純化的抗體樣品
            緩沖液
            磁力架
            離心管
            磁珠預(yù)處理
            根據(jù)磁珠的使用說明,進(jìn)行必要的預(yù)處理。
           
            二、純化步驟
            抗體樣品準(zhǔn)備
            將待純化的抗體樣品置于合適的離心管中。
           
            磁珠結(jié)合
            將適量的蛋白 A/G 磁珠加入抗體樣品中,輕輕混勻。
            在室溫下緩慢旋轉(zhuǎn)或振蕩一定時(shí)間,使抗體與磁珠充分結(jié)合。
           
            磁分離
            將離心管放置在磁力架上,靜置一段時(shí)間,使磁珠聚集在磁場邊緣。
            去除上清液,保留磁珠與抗體的復(fù)合物。
           
            洗滌
            加入適量的洗滌緩沖液,輕輕混勻后再次進(jìn)行磁分離。
            重復(fù)洗滌步驟數(shù)次,以去除未結(jié)合的雜質(zhì)。
           
            抗體洗脫
            加入適當(dāng)?shù)南疵摼彌_液(通常為低pH緩沖液),輕輕混勻。
            室溫下靜置一段時(shí)間后,再次進(jìn)行磁分離。
            收集上清液,即為純化的抗體。
           
            三、技巧與注意事項(xiàng)
            控制結(jié)合時(shí)間
            結(jié)合時(shí)間過短可能導(dǎo)致抗體結(jié)合不全,過長則可能影響抗體活性。需根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整。
           
            選擇合適的緩沖液
            不同的抗體可能對緩沖液的要求不同,需根據(jù)抗體的性質(zhì)選擇合適的緩沖液。
           
            洗滌
            洗滌步驟要完整,以確保去除雜質(zhì),但也要避免過度洗滌導(dǎo)致抗體損失。
           
            注意pH值
            洗脫緩沖液的pH值要適當(dāng),過低可能導(dǎo)致抗體變性,過高則可能導(dǎo)致洗脫效果不佳。
           
            避免污染
            在整個(gè)操作過程中,要注意無菌操作,避免交叉污染。

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