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近些年微生物技術發(fā)展迅猛，在發(fā)酵制藥生產(chǎn)中發(fā)揮的作用也越來越大，而且對全丨世界范圍內的醫(yī)療事業(yè)和環(huán)境保護都有著積極意義，成為一種安全有效地生產(chǎn)價格低廉、純凈的生物制藥的新途徑。
發(fā)酵完成后，發(fā)酵產(chǎn)物存在于發(fā)酵液中，包括菌體細胞、蛋白、糖、水等，提取產(chǎn)物成了一項非常重要的任務，下面分享一下提取發(fā)酵液中產(chǎn)物的一點經(jīng)驗。
1樣品處理：
1. 發(fā)酵液調酸，析出大部分蛋白（產(chǎn)物不怕酸的前提下，也可其他方法除蛋白）
2. 離心，過濾，除掉大部分菌體細胞和蛋白
2樣品分析條件：
色譜柱：
Phenomenex Luna C18（2） 5μm 100? 4.6×150mm
流動相：A：水（0.1%TFA）
B：乙腈
流速：1mL/min
波長：215nm
3樣品制備條件：
儀器：
博納艾杰爾科技Cheetah 制備純化系統(tǒng)
色譜柱：Flash AQ C18 20-35μm 100? 80g 一支
流動相：A：水（0.1%TFA）
B：乙腈
流速：50mL/min
波長：215nm，235nm
上樣量：1.3L（3.73g）
總結
1.發(fā)酵液中成分復雜，容易污染制備色譜柱，因此，我們選擇Flash 大顆粒填料制備柱
2. 提前除去大部分蛋白，以免進樣后析出，堵塞柱篩板
3.發(fā)酵液為水樣，直接上樣會造成C18填料疏水塌陷，出現(xiàn)不保留，因此我們選擇AQ C18親水Flash柱，可純水相洗脫，直接泵抽上樣，只要目標產(chǎn)物有保留，上樣體積可達6倍柱體積以上
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