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通過 VIDEODROP 評(píng)估 LNP 濃度示例分析
使用 VIDEODROP 進(jìn)行 LNP 分析
VIDEODROP 是一種基于干涉原理的創(chuàng)新納米級(jí)成像技術(shù)，能夠在短時(shí)間內(nèi)以高重復(fù)性測(cè)量納米顆粒的尺寸和濃度。
OneDrop & OneClick 實(shí)時(shí)測(cè)量
高再現(xiàn)性最大限度地減少測(cè)量儀之間的誤差
按原樣測(cè)量未純化和未標(biāo)記的樣品
粒徑、分散狀態(tài)、zeta 電位等是核酸藥物評(píng)價(jià)中的重要理化參數(shù)，但使用 VIDEODROP 的單顆粒測(cè)量技術(shù)監(jiān)測(cè)顆粒濃度使其變得不那么復(fù)雜，可以收集數(shù)據(jù)以幫助標(biāo)準(zhǔn)化質(zhì)量控制，在執(zhí)行測(cè)定步驟之前進(jìn)行穩(wěn)定性評(píng)估和比較研究，并在新配方開發(fā)、制造工藝和儲(chǔ)存條件中有效比較顆粒計(jì)數(shù)。
因此，我們將使用VIDEODROP來比較不同條件下mRNA-LNP顆粒的數(shù)量，并重點(diǎn)介紹過程或脂膜成分對(duì)轉(zhuǎn)染活性的影響的測(cè)量結(jié)果。
圖 1. VIDEODROP 如何用于 mRNA-LNP 生產(chǎn)的圖片
LNP 顆粒濃度很重要的過程
使用 mRNA-LNP 制造納米藥物時(shí)需要評(píng)估多個(gè)項(xiàng)目。
在這里，我們將針對(duì)以下四點(diǎn)檢查 VIDEODROP 測(cè)量和流式細(xì)胞儀對(duì)不同制造條件的樣品的測(cè)量：（1）用于合成 LNP 的試劑類型，（2）混合 LNP 和 RNA 的速度，（3）損失由于緩沖液更換，以及（4）由于儲(chǔ)存條件造成的損失，我們比較了所使用的核酸遞送測(cè)定的結(jié)果，并評(píng)估了每個(gè)步驟中濃度測(cè)量的重要性。
分析結(jié)果 顆粒濃度是否影響轉(zhuǎn)染活性？
脂質(zhì)成分的優(yōu)化
在該實(shí)驗(yàn)中，使用相同的工藝制造了兩種具有不同脂質(zhì)成分的LNP，并對(duì)每個(gè)樣品進(jìn)行了測(cè)量。
顆粒濃度不受脂質(zhì)組合物的影響，但脂質(zhì)組合物 1 與脂質(zhì)組合物 2 相比顯示出更高的活性。盡管顆粒數(shù)量幾乎相同，脂質(zhì)組合物1比脂質(zhì)組合物2更有效。
混合速度優(yōu)化
在這里，作為混合速度的優(yōu)化評(píng)估，我們通過改變微流體裝置上的混合速度（流速）從 2 到 18 mL/min 來比較 LNP 的濃度和轉(zhuǎn)染活性。
盡管 LNP 本身的組成相同，但改變混合速度對(duì)顆粒濃度和轉(zhuǎn)染活性有顯著影響。它與粒子數(shù)有直接關(guān)系。
優(yōu)化緩沖液交換
使用切向流過濾（TFF）的緩沖液交換和濃縮步驟用于將用于LNP合成的緩沖液替換為用于施用的緩沖液，并增加制劑的濃度并提高效價(jià)這是LNP合成中的重要步驟。
在這種情況下，緩沖液交換步驟中的顆粒數(shù)量減少了 75%，證實(shí)需要優(yōu)化 TFF 流程。
存儲(chǔ)優(yōu)化
優(yōu)化儲(chǔ)存條件對(duì)于確保產(chǎn)品質(zhì)量至關(guān)重要。在本實(shí)驗(yàn)中，我們測(cè)量了儲(chǔ)存在 +4°C 或 -20°C 下的相同 mRNA-LNP。
測(cè)量結(jié)果表明，與+4°C條件相比，-20°C儲(chǔ)存導(dǎo)致活性下降和顆粒數(shù)量減少。
結(jié)論
Videodrop 是一款即用型工具，只需一滴即可測(cè)量 LNP 顆粒濃度和顆粒尺寸分布。
Videodro 可讓您快速輕松地測(cè)量濃度，從而更好地控制制造過程。
使用納米顆粒計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)化基于細(xì)胞的測(cè)定（轉(zhuǎn)染活性）可改善比較研究中不同條件下產(chǎn)生的 LNP 的評(píng)估
VIDEODROP是完成評(píng)估LNP質(zhì)量的分析策略的理想工具。
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