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          MaxCyte電轉(zhuǎn):開啟角化細(xì)胞工程化之門,重塑皮膚治療未來

          來源:上海昊擴(kuò)科學(xué)器材有限公司   2024年12月05日 10:12  


          內(nèi)容摘要

          (1) 角化細(xì)胞 (Keratinocytes) 在治療多種皮膚、口腔和耳部疾病方面具有潛力。

          (2) 成年角化細(xì)胞的體外培養(yǎng)和擴(kuò)增容易,適合自體和同種異體細(xì)胞治療產(chǎn)品。

          (3) 之前限制:成年角化細(xì)胞缺乏高效的轉(zhuǎn)染方法。

          (4) 本研究目標(biāo):開發(fā)符合GMP標(biāo)準(zhǔn)的、可擴(kuò)展的細(xì)胞工程流程,使用MaxCyte®電穿孔技術(shù)轉(zhuǎn)染來自四個不同解剖位置的新生兒和成年原代角化細(xì)胞。



          實驗流程

          • 從全皮樣、鼓膜、扁桃體、前臂等部位提取純凈的原代角化細(xì)胞。

          • 胞培養(yǎng)、擴(kuò)增、冷凍保存、基因工程、驗證,最終形成細(xì)胞治療產(chǎn)品。



          主要發(fā)現(xiàn)

          使用MaxCyte技術(shù),高效地將mRNA或CRISPR-Cas9核糖核蛋白 (RNPs) 傳遞給原代角化細(xì)胞,不損害細(xì)胞活性、形態(tài)或生長能力。

          上圖:使用MaxCyte ATx電轉(zhuǎn)儀對原代包皮角化細(xì)胞進(jìn)行mRNA-GFP或ATTO550標(biāo)記的CRISPR RNPs電穿孔后的流式細(xì)胞儀分析結(jié)果,顯示了高效的轉(zhuǎn)染效率。


          上圖:使用CCR5靶向CRISPR RNP電穿孔后的原代角化細(xì)胞的生長曲線,電轉(zhuǎn)后細(xì)胞增殖幾乎不受影響。


          上圖:使用MaxCyte ATx儀器對來自不同解剖位置的原代皮膚成纖維細(xì)胞、扁桃體來源的口腔角化細(xì)胞和鼓膜 (中耳) 角化細(xì)胞進(jìn)行ATTO 550標(biāo)記的CRISPR RNPs電穿孔后的流式細(xì)胞儀分析結(jié)果,顯示了高效的轉(zhuǎn)染效率。


          單次電穿孔可實現(xiàn)高效的多重基因編輯,簡化了流程。

          MaxCyte電轉(zhuǎn):開啟角化細(xì)胞工程化之門,重塑皮膚治療未來

          上圖:分別電穿孔1種、2種、6種CRISPR RNPs后96小時,使用Synthego®多向?qū)Щ蚯贸噭┖羞M(jìn)行的流式細(xì)胞儀分析。


          提高了轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞活性,減少了角化細(xì)胞工程時間,提高了成功率。

          展示了MaxCyte電穿孔過程的可擴(kuò)展性,可工程化數(shù)百萬原代角化細(xì)胞,不損失效果。


          MaxCyte電穿孔技術(shù)使原代角化細(xì)胞基因組工程更快,風(fēng)險更低。



          全文結(jié)論

          (1) MaxCyte ATx®平臺提供了一種高效、符合GMP標(biāo)準(zhǔn)的多重轉(zhuǎn)染方法,用于開發(fā)和生產(chǎn)工程化角化細(xì)胞治療產(chǎn)品。

          (2) 電穿孔技術(shù)保持了原代新生兒和成年角化細(xì)胞的高活性、正常形態(tài)和低氧化應(yīng)激。

          (3) 該技術(shù)允許多達(dá)6個CRISPR RNPs的傳遞,經(jīng)過多輪轉(zhuǎn)染,效率不降低。

          (4) 平臺的靈活性允許快速開發(fā)特定亞群的角化細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的自體和同種異體細(xì)胞治療流程。


          (* 本文轉(zhuǎn)載自「拓普百奧」微信公眾號,作者:宇文數(shù)學(xué),已獲得作者授權(quán))





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             上海昊擴(kuò)科學(xué)器材有限公司成立于2019年,總部位于上海,是一家實驗室設(shè)備/耗材及分析儀器的專業(yè)服務(wù)商。公司致力于為生物、醫(yī)藥、物性檢測、化工分析、食品、工業(yè)生產(chǎn)等相關(guān)領(lǐng)域客戶提供國內(nèi)外高科技專業(yè)設(shè)備以及技術(shù)咨詢服務(wù)。



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