細(xì)胞爬片的免疫組化染色

來(lái)源：上海通派生物科技有限公司 2012年10月08日 17:31

細(xì)胞爬片的免疫組化染色

1. 取出細(xì)胞爬片，迅速置入冷丙酮固定 20~30 分鐘。

2. 蒸餾水浸泡 5 分鐘，2 次。人類(lèi)正常細(xì)胞株

3. 打孔液浸泡 5 分鐘。

4. 蒸餾水浸泡 5 分鐘，2 次。

注：第 3、4 步僅用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)抗原，檢測(cè)細(xì)胞膜抗原時(shí)不用。

5. 正常血清封閉：從染片缸中取出切片，擦凈切片背面水分及切片正面組織周?chē)乃?（保持組織呈濕潤(rùn)狀態(tài),）滴加正常山羊或兔血清（與第二抗體同源動(dòng)物血清）處理，37℃，15 分鐘。

附：正常血清配制（或按試劑盒規(guī)定的濃度配制）：按 1:20比例，用 PBS 配制，每張切片需要量按 50μ+5μl （10%拋灑量）計(jì)算。

6. 滴加*抗體：用濾紙吸去血清，不洗，直接滴加*抗體，37℃ 2 小時(shí)（也可置于 4℃冰箱過(guò)夜）。

7. PBS：5 分鐘，2 次（置于搖床）。人類(lèi)正常細(xì)胞株

8. 滴加生物素化的二抗，37℃，40 分鐘。

9. PBS：5 分鐘，2 次（置于搖床）。

10. 滴加三抗（SAB 復(fù)合物），37℃，40 分鐘。

11. PBS：5 分鐘，2 次（置于搖床）。

12. DAB 顯色，鏡下觀察，適時(shí)終止（自來(lái)水沖終止）。

附：DAB 的配制① 儲(chǔ)備液（DAB 25mg/ml）的配制：DAB 250mg + PBS 10ml，待*溶解后分裝成 1ml，100μl，50μl ，20μ l 等，-20℃，凍存。② 工作液：DAB 儲(chǔ)備液 20μl + PBS 1000μl + 3% H2O2 5μl

13. 自來(lái)水（細(xì)水）充分沖洗。

14. 蘇木素復(fù)染，室溫，30 秒，自來(lái)水沖洗。

15. 自來(lái)水沖洗返藍(lán)，15 分鐘。

16. 梯度酒精脫水：80%，2 分鐘 95%，2 分鐘 100%，2 次，5 分鐘。

17. 二甲苯透明：I ，II （二甲苯）各 5 分鐘

18. 封片：加拿大樹(shù)膠（或中性樹(shù)膠）封片。

相關(guān)產(chǎn)品

凡本網(wǎng)注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類(lèi)作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。

黄色视频不卡_午夜福利免费观看在线_亚洲国产精品999在线_欧美绝顶高潮抽搐喷水_久久精品成人免费网站_晚上一个人看的免费电影_国产又色又爽无遮挡免费看_成人国产av品久久久