在液相色譜儀的操作過程中,經(jīng)常會(huì)產(chǎn)生一些基線噪音,如何在使用過程中來避免這些噪音的產(chǎn)生,在本文中會(huì)為大家做一詳細(xì)介紹。
1.流動(dòng)相的在線混合
所有的流動(dòng)相在線混合都是從方便出發(fā)的結(jié)果,流動(dòng)相混合的不充分是基線噪音的一個(gè)重要
來源?;旌戏绞街饕袃煞N:
a.低壓混合:采取時(shí)間脈沖的方式,利用比例閥,將不同流動(dòng)相按一定比例混合。
b.高壓混合:利用多個(gè)泵,控制每個(gè)泵的流量,將不同的流動(dòng)相按一定比例混合。
在流動(dòng)相混合后,一般都有一個(gè)混合器(Mixer)來幫助混合,使之更加充分。從流動(dòng)相開始
混合在一起,到流動(dòng)相到達(dá)色譜柱頭,這一段體積叫做延遲體積(Delay Volume)。Mixer體積
越大,混合越好,但是相應(yīng)延遲體積就越大,造成梯度的延遲。換句話說,就是流動(dòng)相的變化,
需要一定時(shí)間后,才能真正到達(dá)色譜柱,對(duì)分離產(chǎn)生影響。這個(gè)現(xiàn)象在使用UPLC或者UHPLC
的時(shí)候,會(huì)有比較明顯的作用。
為什么相同梯度方法,在不同儀器,或者不同品牌的儀器之間轉(zhuǎn)化時(shí),保留時(shí)間可能不一樣?
其主要原因就是延遲體積的不同。
在線混合很難做到非常均一的混合效果,這個(gè)在示差檢測器(RID)上的效果zui明顯。這也
是為什么示差檢測器都要求將流動(dòng)相預(yù)混到一個(gè)瓶子里,不能走梯度的原因。
那如何減小因?yàn)榛旌隙斐傻幕€噪音呢?
a.對(duì)于等度的方法,非常簡單,預(yù)混流動(dòng)相就可以了。
b.對(duì)于梯度的方法,部分預(yù)混流動(dòng)相也會(huì)幫助更好的混合,怎么做呢?看下面的例子。
方法要求乙腈/水比例從10%走到85%。 那可以將流動(dòng)相A配成10%的乙腈,流動(dòng)相B
配成85%的乙腈,然后A/B梯度從0%走到100%。 這就是部分預(yù)混。
c.增大Mixer的體積。一般mixer的體積從幾百ul到幾個(gè)ml都有,在允許的延遲時(shí)間下,
更換一個(gè)體積更大的Mixer,能夠有效提高混合的效率。每個(gè)色譜生產(chǎn)廠家的Mixer體積都不一樣,基本都可以混用。
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