手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
問：
zui近做細(xì)胞轉(zhuǎn)染，預(yù)篩選穩(wěn)定克隆，載體為pEgfp-N1，pIERS
現(xiàn)在是平行做幾個基因，轉(zhuǎn)然后，只有空載體和一個基因可以看到綠色熒光，其余均沒有，這會是什么原因呢?怎么補(bǔ)救啊?
答：
需要考慮的問題有：
1.你的細(xì)胞和轉(zhuǎn)染的方法，是不是你的細(xì)胞本身就很難轉(zhuǎn)染，有些細(xì)胞用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染率很低的。在求助時告知細(xì)胞和具體的轉(zhuǎn)染方法和試劑。
2.質(zhì)粒的純度和質(zhì)量：看你使用那種試劑盒提取的，我們的經(jīng)驗是使用Qiagen比國產(chǎn)的一些試劑盒差別很大。
3.pEGFP-N1可用來表達(dá)融合蛋白，如果你插入的目的基因帶終止密碼子的話，這時候如果轉(zhuǎn)讓率很低的話沒有綠色熒光，只有空載有綠色熒光，但是在轉(zhuǎn)染293T時我們發(fā)現(xiàn)帶終止密碼子的載體還可以見到熒光，但比空載明顯弱許多，不像空載體一樣所有的細(xì)胞都帶GPF。所以，不知你克隆時目的基因是否帶有終止密碼，如果去掉終止密碼子也要注意是否發(fā)生移碼錯位。
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心