前言:我們大家都知道生物實驗中有個重要的實驗就是酶特性的實驗,那么在做實驗時有一個用來對酶進(jìn)行做標(biāo)記的儀器就是酶標(biāo)儀,我們并不是特別的了解酶標(biāo)儀,知識知道它的作用而已。下面就由小編為大家做一下酶標(biāo)儀的簡單介紹,希望對大家了解酶標(biāo)儀有所幫助。
酶標(biāo)儀介紹:主要由光源系統(tǒng)、單色器系統(tǒng)、樣品室、探測器和微處理器控制系統(tǒng)等組成
酶標(biāo)儀原理:實際上就是一臺變相的光電比色計或分光光度計,其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計基本相同. 如圖是一種單通道自動進(jìn)樣的酶標(biāo)儀工作原理圖.
光源燈發(fā)出的光線經(jīng)過濾光片或單色器后,成為一束單色光。該單色光束經(jīng)過酶標(biāo)板中的待測標(biāo)本,被標(biāo)本吸收掉一部分后,另一部分則透過標(biāo)本照射到光電檢測器上,光電檢測器將這一待測標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號。光電檢測器將投照到上面的光信號的強(qiáng)弱轉(zhuǎn)變成電信號的大小。此電信號經(jīng)前置放大、對數(shù)放大、模數(shù)轉(zhuǎn)換等處理后,送人微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計算,較為后通過顯示器和打印機(jī)輸出測試結(jié)果。
酶標(biāo)儀的分類:
按照濾光方式的不同可分為:濾光片式的酶標(biāo)儀和光柵式酶標(biāo)儀
按照功能可以分為:光吸收酶標(biāo)儀,熒光酶標(biāo)儀,化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀和多功能的酶標(biāo)儀
濾光片式的酶標(biāo)儀:采用濾光片來進(jìn)行波長的選擇,酶標(biāo)儀內(nèi)置濾光片輪,可選擇試驗所需的不同波長的濾光片來進(jìn)行分光,光源發(fā)出的全波譜光經(jīng)過濾光片后,大部分被過濾,只剩下濾光片本身允許的波長通過,這樣就可就通過濾光片來獲得特定的波長
光柵式酶標(biāo)儀:采用光柵進(jìn)行分光,光源發(fā)出的全波譜光線經(jīng)過光柵后,通過光柵上面分布的一系列狹縫的分光,就可以獲得任意波長的光,波長連續(xù)可調(diào),一般遞增量為1nm.
光吸收酶標(biāo)儀:用來進(jìn)行可見光與紫外光吸光度的檢測.特定波長的光通過微孔板中的樣品后,光能量被吸收,而被吸收的光能量與樣品的濃度呈一定的比例關(guān)系,由此可以用來定性和定量的檢測。
熒光酶標(biāo)儀:用來進(jìn)行熒光的檢測.通過激發(fā)光柵分光后的特定波長的光照射到被熒光物質(zhì)標(biāo)定的樣品上后,會發(fā)出波長更長的發(fā)射光,通過發(fā)射光柵后到達(dá)檢測器.熒光的強(qiáng)度與樣品的濃度呈一定的比例
化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀:來自生物化學(xué)反應(yīng)中的自發(fā)光,可分為輝光型和閃光型兩種類型.輝光型發(fā)光持久,穩(wěn)定,能持續(xù)一段時間;閃光型發(fā)光時間短,變化快,穩(wěn)定性不強(qiáng),需要應(yīng)用自動加樣器才可以進(jìn)行
多功能的酶標(biāo)儀:可以同時進(jìn)行光吸收,熒光和化學(xué)發(fā)光的檢測
優(yōu)缺點(diǎn):
名稱: | 優(yōu)點(diǎn): | 缺點(diǎn): |
濾光片式酶標(biāo)儀 | 通過選擇不同的濾光片 可獲得不同的波長 | 因濾光片固定所以波長都是固定 并且濾光片價格比較昂貴 |
光柵式酶標(biāo)儀 | 使用方便靈活可以進(jìn)行全波長的掃描 | 價格貴 |
光吸收酶標(biāo)儀 | 檢測檢測技術(shù)成熟,成本低,操作簡單 | 動態(tài)范圍窄,靈敏度比較低,特異性不強(qiáng) |
熒光酶標(biāo)儀 | 靈敏度高,可實時檢測,使用方便,檢測模式多樣 | 易受外界干擾激發(fā)光與發(fā)射光容易互相影響 |
化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀 | 輝光型發(fā)光持久穩(wěn)定,能持續(xù)一段時間 | 閃光型發(fā)光時間短,變化快,穩(wěn)定性不強(qiáng) |
多功能的酶標(biāo)儀 | 功能強(qiáng)大,使用范圍廣避免了重復(fù)購買 | 價格昂貴 |
酶標(biāo)儀安裝環(huán)境要求:
儀器應(yīng)放置在無磁場和干擾電壓的位置。
儀器應(yīng)放置在低于40分貝的環(huán)境下。
為延緩光學(xué)部件的老化,應(yīng)避免陽光直射。
操作時環(huán)境溫度應(yīng)在15℃-40℃之間,環(huán)境濕度在15%-85%之間。
操作電壓應(yīng)保持穩(wěn)定。
操作環(huán)境空氣清潔,避免水汽,煙塵。
保持干燥、干凈、水平的工作臺面,以及足夠的操作空間。
酶標(biāo)儀的檢測流程:
使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體,這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開,較為后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高,故可極大地放大反應(yīng)效果,從而使測定方法達(dá)到很高的敏感度。
酶標(biāo)儀的八大特性功能:
一、測定波長。目前國內(nèi)常見的ELISA試劑盒所使用的標(biāo)記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP),底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD)。
二、測定的吸光度范圍。通常,酶標(biāo)儀的吸光度測定范圍在。0-2.5之間即可以滿足ELISA的測定要求。早期的酶標(biāo)儀可測定的吸光度一般在0-2.5之間,但現(xiàn)在基本上都做了拓寬,可達(dá)到3.5以上,并且能保持很好的精密度與線性。
三、光學(xué)系統(tǒng)。酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道,亦有單通道)檢測,一般為硅光管或光導(dǎo)纖維,除測定通道外,有的酶標(biāo)儀還有一個參比通道,每次測定可進(jìn)行自我校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能如何,均可通過酶標(biāo)儀測定的吸光度范圍、線性度、精密度和準(zhǔn)確度等體現(xiàn)出來。
四、檢測速度。酶標(biāo)儀的檢測速度是指其完成比色測定所需要的時間。檢測速度快,有利于提高檢測的精密度,即避免由于測定過程中,因測定時間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。目前市場上常見的酶標(biāo)儀檢測速度都非???,通常在數(shù)秒鐘內(nèi)。
五、震板功能。酶標(biāo)儀的震板功能是指酶標(biāo)儀在對ELISA板孔進(jìn)行比色測定前對其進(jìn)行振蕩混勻,使板孔內(nèi)顏色均一。目前市場上常見的酶標(biāo)儀均有震板功能,所不同的是震板方式,有的可按上下、左右或旋轉(zhuǎn)等方式及振蕩幅度等任意調(diào)節(jié)。
六、溫育功能。溫育功能是指酶標(biāo)儀本身能按要求自動地控制儀器內(nèi)部的溫度,使得ELISA測定中微孔板條的溫育過程可在儀器內(nèi)部完成,而無需再外配溫箱。目前,只有少部分酶標(biāo)儀具有此種功能
七、軟件功能。軟件功能是指酶標(biāo)儀所具有的對ELISA定性和定量測定及其他測定方式如酶標(biāo)動力學(xué)、紫外和凝集等數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析并報告結(jié)果的功能。軟件功能是中酶標(biāo)儀的一個非常重要的功能。如果硬件方面區(qū)別不大,則軟件就成為判定酶標(biāo)儀優(yōu)劣的惟一指標(biāo)。對于用戶來說,好的軟件功能,對實際工作會有較大的幫助。
八、語言界面。通常進(jìn)口的中酶標(biāo)儀人機(jī)對話多采用英文。這對于某些基層實驗室可能會存在語言方面的困難,從而難以較為大限度地發(fā)揮酶標(biāo)儀的作用。為解決這方面的問題,已有一些酶標(biāo)儀采用了中文界面
酶標(biāo)儀使用時注意事項:
在測量過程中,請勿碰酶標(biāo)板,以免酶標(biāo)板傳送時擠傷操作人員的手
請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部,操作完成后請洗手。
儀器如果接觸過污染性或傳染性物品,請進(jìn)行清洗和消毒
洗板要洗干凈。盡量使用洗板機(jī)洗板,避免交叉污染。
嚴(yán)格按照試劑盒的說明書操作,反應(yīng)時間準(zhǔn)確。
使用加液器進(jìn)行加液,加液頭不能混用。
不要在測量過程中關(guān)閉電源。
對于因試劑盒問題造成的測量結(jié)果的偏差,可以根據(jù)實際情況及時修改參數(shù),以達(dá)到較為佳效果。
使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學(xué)危害,請嚴(yán)格按照試劑盒的操作說明,以防對操作人員造成損害。
使用后蓋好防塵罩。
出現(xiàn)技術(shù)故障時應(yīng)及時與廠家,切勿擅自拆卸酶標(biāo)儀。
常見故障:
1、打印機(jī)不工作
酶標(biāo)儀后部DIL開關(guān)設(shè)置不正確。
酶標(biāo)儀內(nèi)置打印機(jī)開關(guān)處于開的位置。在總參數(shù)中設(shè)置內(nèi)置打印機(jī)為關(guān)。
打印機(jī)無紙或紙未裝好,請裝好打印紙。
打印機(jī)未聯(lián)機(jī),請確認(rèn)打印機(jī)上的聯(lián)機(jī)鍵已聯(lián)機(jī)
打印機(jī)接口接錯(接在了計算機(jī)接口上了)。應(yīng)將打印機(jī)接在DIL開關(guān)正下方的打印機(jī)接口上,RS-232接口為計算機(jī)接口。
打印機(jī)聯(lián)線有問題:有些配備的新打印機(jī)聯(lián)線仍有問題,請確保打印機(jī)聯(lián)線無問題。
打印機(jī)有開機(jī)順序,需先開打印機(jī),后開儀器;有的需先開儀器,后開打印機(jī)。
2、調(diào)不出所編輯程序
如在臨界值模塊下編輯儲存的程序必須要在臨界值模塊下調(diào)出。
空白或陰性位置不正確。
肉眼結(jié)果與酶標(biāo)儀測定結(jié)果差異較大。
濾光片設(shè)置不正確:請在“參數(shù)”中按濾光片輪中實際的情況設(shè)置濾光片。
酶標(biāo)儀的應(yīng)用范圍:不僅應(yīng)用在醫(yī)療行業(yè),用于酶聯(lián)免疫學(xué)的檢測工作,而且在食品衛(wèi)生,農(nóng)業(yè),畜牧等產(chǎn)業(yè)以及各高等院校實驗室中都有廣泛的應(yīng)用。
在醫(yī)學(xué)上采用酶聯(lián)免疫吸附試驗進(jìn)行血液學(xué),免疫學(xué),腫瘤免疫學(xué),傳染病免疫學(xué),優(yōu)生優(yōu)育的血清學(xué)及基因?qū)嶒?。檢測項目主要包含以下幾項:
1,傳染病類:例如肝炎,艾滋病,衣原體,肺炎支原體,梅毒,水痘等
2,甲狀腺:促甲狀腺激素,T3T4等
3,不孕癥:性激素六項,泌乳素,雌三醇,生長素,抗精子抗體等
4,優(yōu)生優(yōu)育:弓形蟲抗體,巨細(xì)胞病毒,風(fēng)疹病毒等
5,腫瘤標(biāo)志物:癌胚抗原,甲胎蛋白,乳腺癌,卵巢癌,膀胱癌,胃腸癌等
6,糖尿?。篊肽,胰島素,胰島素抗體,胰島素原等
7,過敏原,皮膚不耐受等
在食品以及農(nóng)畜業(yè)的檢測項目包括:營養(yǎng)成分,添加劑,農(nóng)藥殘留量,菌毒素,無機(jī)毒素,抗生素激素殘留,致癌物質(zhì)殘留,有毒有害物質(zhì)污染等。
以上就是上海旦鼎貿(mào)易有限公司為大家介紹的酶標(biāo)儀的有關(guān)知識,如有需要轉(zhuǎn)載敬請說明,謝謝!
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