大鼠雌激素受體(ER)操作步驟

1.  標(biāo)準品的稀釋： 本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支， 用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

100 ng/L  5 號標(biāo)準品  150μl 的原倍標(biāo)準品加入 150μl 標(biāo)準品稀釋液

50 ng/L  4 號標(biāo)準品  150μl 的 5 號標(biāo)準品加入 150μl 標(biāo)準品稀釋液

25 ng/L  3 號標(biāo)準品  150μl 的 4 號標(biāo)準品加入 150μl 標(biāo)準品稀釋液

12.5 ng/L  2 號標(biāo)準品  150μl 的 3 號標(biāo)準品加入 150μl 標(biāo)準品稀釋液

6.25 ng/L  1 號標(biāo)準品  150μl 的 2 號標(biāo)準品加入 150μl 標(biāo)準品稀釋液

2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同） 、標(biāo)準孔、待測樣品孔。 在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣 50μl， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5 倍） 。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.  溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.  配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復(fù) 5 次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。

7.  溫育：操作同 3。

8.  洗滌：操作同 5。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色） 。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。