自從20世紀70年代中期融合標簽技術出現(xiàn)以來,親和標簽已成為一種重組蛋白純化十分有效的工具,具有結(jié)合特異性高、純化條件溫和、純化步驟簡便、適用性廣泛等顯著優(yōu)勢。通常,親和標簽定義為對特定的生物或化學配基具有高度親和力的一段氨基酸序列,可以分成很多類,其中一個常用的小分子短肽標簽是FLAG標簽。
通常,F(xiàn)LAG標簽系統(tǒng)使用合成的FLAG短肽在非變性條件下進行融合蛋白的洗脫,從而保證了ELISA融合蛋白的生物活性。然而,F(xiàn)LAG短肽合成成本較高,不適用于大規(guī)模純化,且需要額外步驟除去結(jié)合在層析介質(zhì)上的短肽。
ELISA方法改進:
為此,我們進行了以下改進:
(1)改用精氨酸在偏酸條件下進行FLAG融合蛋白的洗脫,不僅純化*,而且大大降低了純化成本,簡化了純化步驟。
(2)結(jié)合一個接頭結(jié)構的3*FLAG標簽,這種標簽天然親水,因而不會改變?nèi)诤系鞍椎墓δ?,遮蓋融合蛋白的其他表位,或者降低融合蛋白的可溶性,尤其合適于某些需要維持生物活性的小分子目標蛋白。
111524-200503 木香烴內(nèi)酯 對照品 含量測定 20mg
111525-200404 去氫木香內(nèi)酯 對照品 鑒別 20mg
111528-200504 蒙花苷 對照品 含量測定 20mg
111529-200302 五味子酯甲 對照品 鑒別 20mg
111530-200505 毛蕊花糖苷(麥角甾苷) 對照品 含量測定 20mg
111531-200001 毛兩面針素 對照品 鑒別 20mg
111532-200202 巖白菜素 對照品 鑒別 50mg
ELISA111533-200403 高三尖杉酯堿 對照品 鑒別 20mg
111534-200202 紫杉醇 對照品 含量測定 20mg
111535-200502 白藜蘆醇 對照品 含量測定 20mg
111536-200304 土貝母苷甲 對照品 鑒別 20mg
111537-200501 松脂醇二葡萄糖苷 對照品 含量測定 20mg
111538-200403 槲皮苷 對照品 含量測定 20mg
111539-200001 薯蕷皂苷元 對照品 含量測定 20mg
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