隨著抗生素在乳畜飼養(yǎng)業(yè)中的廣泛應(yīng)用，牛奶中抗生素殘留問題日益受到社會的重視。對此，檢測技術(shù)也迅速發(fā)展，以尋求簡便、快速、準(zhǔn)確、敏感性高的檢測方法滿足日趨嚴(yán)格的殘留*，保障人們飲用牛奶的衛(wèi)生和安全。

　　1.牛奶中抗生素殘留的來源及其危害

　　1.1牛奶中抗生素殘留的來源

　　一般認(rèn)為，對泌乳牛用藥不當(dāng)或不注意安全時(shí)間是牛乳中抗生素殘留的重要因素，尤其是使用乳房灌注法乳腺炎時(shí)，易造成牛乳中抗生素殘留。在牛飼料中添加飼料添加劑已十分普遍，其中含有一定比例的抗生素，主要作用是預(yù)防疾病，這是牛奶抗生素殘留的重要原因。此外，一些不法交奶戶在高溫季節(jié)為防止乳的酸敗，往往向牛乳中摻雜各種抗生素，這也是乳中抗生素殘留的一個(gè)來源。1983年，Egan調(diào)查表明，用經(jīng)抗生素的乳牛用過的擠乳器給正常乳牛擠乳，可使正常牛的乳中殘留抗生素，所以擠乳是乳中抗生素殘留的另一個(gè)來源。

　　1.2牛奶中抗生素殘留的危害

　　牛奶是老少皆宜的營養(yǎng)品，牛奶中若含有抗生素，對長期飲用者來說無疑是等于長期服用小劑量的抗生素，對抗生素有過敏體質(zhì)的人服用殘留抗生素的乳后會發(fā)生過敏反應(yīng)。即使是正常飲用者，體內(nèi)的某些條件性致病菌易產(chǎn)生耐藥性，一旦患病再用同種抗生素很難奏效。抗生素是奶牛場乳房炎的常規(guī)藥物，由于長期大量使用，使耐藥菌株增加，一些乳房炎病例變得難以用常規(guī)方法治愈。這種情況又促使臨診獸醫(yī)在過程中加大抗生素的用量。此外，牛奶中抗生素殘留會影響奶制品品質(zhì)，如果用含抗生素的奶做酸奶或乳酪等，則殘留在其中的抗生素會抑制細(xì)菌的發(fā)酵，使產(chǎn)量和降低。因此市場不允許出售抗生素殘留過量的牛奶，同時(shí)也造成牛奶*者的經(jīng)濟(jì)損失。

　　2.牛奶中抗生素殘留的現(xiàn)狀

　　牛奶中抗生素殘留問題日益受到社會的重視。1991年底，美食品藥物管理局（FDA）報(bào)告，在234個(gè)鮮乳樣品中只有一個(gè)樣品檢出磺胺二甲嘧啶，其殘留量低于10×10－6允許量。1992年上半年又檢查了197個(gè)樣品，結(jié)果有4個(gè)樣品檢出磺胺殘留，但殘留量在安全水平以下，均沒有檢出四環(huán)素、氯霉素和青霉素。1990～1991年期間，美奶業(yè)基金會（Milk Industry Foundation）對牛乳和*乳制品會員廠進(jìn)行全面的藥物殘留檢查，抽查率90％以上，結(jié)果為：1990年不合格率0.12％，1991年0.8％；并規(guī)定超過允許量標(biāo)準(zhǔn)的牛乳及其乳制品全部廢棄處理，不得食用。歐美多年前即明文禁止抗生素殘留超量的牛奶上市（對青霉素類藥物的*為4～10μg/kg）。

　　我過去對牛奶中抗生素殘留衛(wèi)生指標(biāo)無明文規(guī)定，直到2001年10月，農(nóng)業(yè)部發(fā)布實(shí)施了《無公害食品生鮮牛乳標(biāo)準(zhǔn)》，對新鮮牛乳的衛(wèi)生指標(biāo)明確了“抗生素不得檢出”。但對這一標(biāo)準(zhǔn)，我目前并未能嚴(yán)格執(zhí)行，致使我牛奶及奶制品中抗生素殘留問題一直未能得到解決，以引起了人們對牛奶安全問題的擔(dān)憂，并成為越來越受關(guān)注的熱點(diǎn)。 1988年，周樹南對江蘇省8市10個(gè)牧場的鮮奶、消牛奶和奶粉中抗生素殘留情況進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)鮮奶陽性率3.6％，消牛奶11.4％，奶粉39.58％。李權(quán)超（1991）、王曉光（1992）測得長春市市售鮮牛奶中抗生素殘留陽性率3.3％，可疑率18.3％和2.5％。張利琴（1999）、常建軍（2000）測得西寧市市售鮮奶中抗生素陽性率分別為2％、11.7％和5.3％。 葛華等（1996）對西寧市各類奶樣進(jìn)行調(diào)查，共采集奶樣187份（奶牛場生奶110份、牛奶公司袋裝消奶35份、私人沿街售奶42份），檢出有抗生素殘留奶8份，陽性率4.3％。王春奕等（1996）檢測的5批25份市售消鮮牛奶中抗生素殘留分?jǐn)?shù)在1.5×l0－9以上，超過了衛(wèi)生組織（WHO）和聯(lián)合糧農(nóng)組織（FAO）規(guī)定的奶中青霉素含量為0的標(biāo)準(zhǔn)。并認(rèn)為這可能與飼料中添加的抗生素過量和獸醫(yī)臨床大劑量長期使用抗生素有關(guān)。馬群飛等（2002）對福建省生牛乳抗生素殘留情況進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果86件鮮乳樣中共檢出抗生素殘留陽性樣品17件，檢出率19.8％。據(jù)此提出福建省乳牛散養(yǎng)農(nóng)戶*的生牛乳抗生素殘留陽性率較高，應(yīng)通過改善飼養(yǎng)條件和加強(qiáng)監(jiān)測予以控制。

      從以上情況可以看出，我牛奶中抗生素殘留現(xiàn)狀并不令人樂觀，有關(guān)部門應(yīng)加強(qiáng)對牛奶*的管理，并對牛奶中的抗生素等藥物殘留進(jìn)行有效檢測和，以保證人們飲用牛奶的衛(wèi)生和安全。

 

　　1、微生物檢測法：

　　微生物檢測法是應(yīng)用較廣泛的方法，其測定原理是根據(jù)抗生素對微生物的生理機(jī)能、代謝的抑制作用,來定性或定量確定樣品中抗微生物藥物殘留，如紙片法（PD）、TTC法、拭子法（STOP）等。采用傳統(tǒng)的微生物檢測方法，缺點(diǎn)是：（1）時(shí)間長；（2）顯色狀態(tài)判斷通過肉眼辨別，易產(chǎn)生，對微紅色者無法做出準(zhǔn)確判斷；（3）操作復(fù)雜。優(yōu)點(diǎn)是費(fèi)用低，一般都能操作。其中， 紙片法和TTC法是牛奶中藥物殘留檢測的兩種常用的微生物檢測法。

　　1.1紙片法：

　　紙片法，即PD法（Paper Disc）。常用的紙片法有枯草桿菌紙片法和嗜熱脂肪桿菌紙片檢測法。這兩種方法主要用來檢測牛奶中的β－內(nèi)酰胺類抗生素，其操作過程基本相同，而選用的菌種不同?？莶輻U菌紙片法檢測的結(jié)果易出現(xiàn)假陽性，為了確定陽性物質(zhì)是否為青霉素（或β－內(nèi)酰胺類），對加熱后的乳樣用青霉素酶處理，以滅活乳樣中的青霉素。然后再行檢測，檢測限可達(dá)0.01 IU/mL。而嗜熱脂肪桿菌紙片檢測法不僅用于檢測奶樣中β－內(nèi)酰胺類抗生素，并能暗示是否還存在其它抑菌物質(zhì)，檢測限可達(dá)0.008 IU/mL以下。一般在4h內(nèi)即可獲得結(jié)果。因此，在實(shí)踐中嗜熱脂肪桿菌紙片法比枯草桿菌紙片法應(yīng)用更為廣泛。此外，神保勝彥（1991）對紙片法作了進(jìn)一步研究和改進(jìn)。改進(jìn)后的紙片法不僅能夠確定抗生素的種類，而且提高了檢出率和準(zhǔn)確性，氯霉素低檢出量0.01mg/kg，土霉素0.05mg/kg，鏈霉素1mg/kg，紅霉素0.05mg/kg，青霉素0.0025mg/kg。

　　1.2 TTC法：

　　TTC法，即氯化三苯基四氮唑法（ tripheye tetrazolium chloride），是目前我食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的檢查牛乳中抗生素殘留的檢測方法（GB5409—85）。該法簡便、快速，無需特殊設(shè)備，3～4h可見報(bào)告，很適合牧場、乳品廠及食品衛(wèi)生檢測部門采用。檢測各種抗生素所用的TTC法試驗(yàn)的靈敏度（低檢出量）分別為：青霉素0.004 U/mL，鏈霉素0.5 U/mL，慶大霉素0.4 U/mL，卡那霉素5 U/mL。

　　目前趨向研究更為靈敏、準(zhǔn)確、簡便、快速的微生物檢測方法。如美和加拿大，使用拭子法和牛的抗生素和磺胺實(shí)驗(yàn)法（CAST）。此外，美近年來補(bǔ)充的一個(gè)新的實(shí)驗(yàn)方法－快速抗生素篩選法（FAST）。 盡管這些快速微生物檢測法有時(shí)會產(chǎn)生一些假陽性，但在某種程度上是允許的；如產(chǎn)生這類情況，可進(jìn)一步做確證實(shí)驗(yàn)。

　　2、理化檢測法：

　　理化檢測方法是利用抗生素分子中的基團(tuán)所具有的特殊反應(yīng)或性質(zhì)來測定其含量，如液相色譜法、氣相色譜法、質(zhì)譜法、聯(lián)用技術(shù)等等，能進(jìn)行定性、定量和藥物鑒定，敏感性較高，但有的檢測程序較復(fù)雜，有的檢測費(fèi)用較高。在牛奶中抗生素殘留檢測方面，常用的理化檢測方法是液相色譜和聯(lián)用技術(shù)。

　　2.1液相色譜

　　液相色譜（HPLC）是目前廣泛應(yīng)用的一種理化檢測方法，它引入了氣相色譜理論，在技術(shù)上采用了高壓泵，固定相和高靈敏度檢測器，實(shí)現(xiàn)了分離速度快、效率高和操作自動化。幾乎所有的化合物包括高性／離子型待測物和大分子物質(zhì)，均可用HPLC進(jìn)行測定。HPLC的分離機(jī)制與常規(guī)柱色譜相同，但填料更加細(xì)（ф 5～10μm），需高壓泵推動，柱效高（105塔板／m），速度快，靈敏度與GC相近。與GC相比，HPLC流動相參與分離機(jī)制，其組成、比例和pH值等可靈活調(diào)節(jié)，如離子對色譜、膠束色譜、手性分離色譜等，使許多難分離的待測物得以分析。反相HPLC發(fā)展快，目前已成為大多數(shù)抗生素殘留的常規(guī)分析方法。主要原因是：（1）化學(xué)鍵合固定相（C18或C8）性質(zhì)穩(wěn)定，不淋失；（2）使用水、甲醇或乙腈等水溶性有機(jī)溶劑作流動相，不干擾紫外檢測，成本低；（3）樣品中性雜質(zhì)先流出，只需待測物出峰后即可重復(fù)進(jìn)樣，分析速度快。

　　常用的檢測方式為濃度型的紫外檢測器和熒光檢測器。紫外檢測器（UVD）普及，其次是熒光檢測器和電化學(xué)檢測器（EChD）。由于奶樣中藥物殘留量少，背景干擾往往很嚴(yán)重，因此一般都通過柱前衍生反應(yīng)來提高紫外檢測器檢測殘留的靈敏度。彭莉等報(bào)道了用液相色譜法（HPLC）檢測牛奶中氯霉素的殘留量，采用乙酸乙酯提取牛奶中殘留的氯霉素，用紫外檢測器在278nm檢測樣品。平均加收率94.8％，變異系數(shù)< 12.0％。此方法樣品前處理簡單、回收率高、實(shí)用性強(qiáng)、檢驗(yàn)靈敏度高、重現(xiàn)性好、檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，可作為牛奶中氯霉素殘留檢測的確證方法。由于大部分抗生素在高于230nm的光譜區(qū)無吸收，而在低于230nm的紫外區(qū)許多樣本基質(zhì)和流動相產(chǎn)生干擾，需衍生化后測定，限制了紫外檢測器的應(yīng)用。但是，大部分抗生素是手性分子，因此旋光檢測器有很大發(fā)展?jié)摿ΑＰ鈾z測有以下特點(diǎn)：（1）選擇性高，樣本僅需簡單提取即可；（2）靈敏度高，利用He－He激光作光源，靈敏度可達(dá)5～10uα水平；（3）可同時(shí)得到流出組分的比旋度[α]，用以定性。目前，該方法已用于紅霉素、慶大霉素、羧芐青霉素和吩羧青霉素殘留的測定。

　　此外，光二管陣列檢測器（DAD）是近10年來HPLC重要的突破。DAD可同時(shí)接收整個(gè)光譜區(qū)的信息，在色譜峰流出同時(shí)能進(jìn)行每個(gè)瞬間的動態(tài)光譜掃描并快速采集信號，經(jīng)計(jì)算機(jī)處理后得到色譜—光譜的三維圖譜，信息量大大增加。一次進(jìn)樣可得到每個(gè)組分峰的定量、定性和純度信息，靈敏度亦明顯提高。

　　2.2聯(lián)用技術(shù)

　　各種分析技術(shù)聯(lián)用是現(xiàn)代獸藥殘留分析乃整個(gè)分析化學(xué)方法上的發(fā)展特點(diǎn)。計(jì)算機(jī)的應(yīng)用加速了這一趨勢。聯(lián)用技術(shù)可揚(yáng)長避短，一般集分離、定量和定性（分子結(jié)構(gòu)信息）于一體，因而特別適用于確證性分析。常見的聯(lián)用技術(shù)，有TLC－MS、GC－MS、LC－MS、CZE－MS、LC－NMR、SFC－MS等。TLC－MS是簡單的離線聯(lián)用技術(shù)。GC－MS已相當(dāng)成熟，應(yīng)用相對較多。但這些聯(lián)用儀價(jià)格昂貴，遠(yuǎn)不如HPLC或GC那樣普及。

　　 MS無疑可作為HPLC的通用型檢測器。使用微型柱（15×0.3cm id）和適宜的接口技術(shù)，如熱噴霧（TSP）、微粒束（PB）等解決了LC與MS的連接問題；使用軟電離技術(shù)，如快原子轟擊（FAB）、場解吸（FD）等解決了難氣化物質(zhì)的離子化問題。LC－MS現(xiàn)在已進(jìn)入實(shí)用階段，其靈敏度較熒光檢測器高1個(gè)數(shù)量級，能方便地對ng級的獸藥殘留組分進(jìn)行檢測與結(jié)構(gòu)確證。LC－NMR還可提供待測物立體化學(xué)方面的信息。

　　LC/MS是除GC/MS之外的一種集分離和多組分定性、定量于一體的系統(tǒng)。LC/MS對高沸點(diǎn)、不揮發(fā)和熱不穩(wěn)定的化合物分離和鑒定具有的優(yōu)勢。色/質(zhì)聯(lián)用法由于實(shí)現(xiàn)了層析分離和檢測聯(lián)機(jī)，可用微電腦控制層析條件、程序和數(shù)據(jù)處理，其特異性、靈敏度和重復(fù)性均好，并可一次同時(shí)完成同一樣本中多種藥物及其代謝物檢測。其分析方式有直接探頭分析法、直接液體導(dǎo)入法、GC/MS、LC/MS聯(lián)用法等。使用電子轟擊離子化、化學(xué)電離、快速原子轟擊、熱噴霧電離、等離子體噴霧、粒子束電離、大氣壓化學(xué)電離（APCI）和電噴霧電離（ESI）技術(shù)對不同MS離子源條件下青霉素類藥物分子碎片類型的特征已經(jīng)作了大量的工作。另外離子阱質(zhì)譜技術(shù)（MS/MS）也已用于鑒別青霉素類藥物。如Straub等使用LC/ES/MS測定了牛奶中的幾種青霉素殘留。青霉素，鄰氯青霉素與芐青霉素的低測定限為3～5μg/kg。Kihak 等以NCI方式的LC/PB/MS技術(shù)成功地對牛奶中OTC、TC與CTC殘留進(jìn)行確證，方法檢測限為0.02～0.05μg/mL。

　　2.3其它理化檢測方法：

　　牛奶中抗生素殘留檢測方法還有氣相色譜法（GC）、薄層色譜（HPTLC）、超臨界流體色譜（SFC）和毛細(xì)管區(qū)域電泳法（CZE）等。這些方法盡管在殘留檢測中不常用，但因其各自*的性能，能彌補(bǔ)常用方法中不足之處。如GC有許多高靈敏、通用性或一性強(qiáng)的檢測器供選用，如氫焰離子化檢測器（FID）、氯磷檢測器（NPD）等，檢測限可達(dá)μg/kg級；HPTLC的斑點(diǎn)原位掃描定量、定性和分離材料（Φ3～10μm）改變了常規(guī)TLC在靈敏度和重現(xiàn)性方面的不足，但保持了TLC的簡便、快速和樣品容量大的優(yōu)點(diǎn)，可使用正相或反相板，分辨率幾乎與HPLC相當(dāng)，在抗生素殘留的快速篩選性檢測方面應(yīng)用廣泛；SFC可彌補(bǔ)GC和HPLC的不足，方便地連接各種靈敏的檢測器（MS，ECD等）；CZE是90年代以來研究活躍的分析技術(shù)之一，兼有高壓電泳的高速、高分辨和HPLC靈活、的優(yōu)點(diǎn)，柱效高達(dá)105塔板／m。 Nishi等（1989，1990）使用CZE和MEKC成功地分離了十幾個(gè)β－內(nèi)酰胺類抗生素。CZE將在簡化樣本前處理、多殘留分析和分析自動化方面發(fā)揮重要作用。目前CZE的主要問題是樣品量太小，限制了檢測的靈敏度。CZE－MS可能是的解決辦法。

　　此外，隨著接口技術(shù)的顯著改進(jìn)，質(zhì)譜作為一種流速型檢測器，正廣泛應(yīng)用于殘留分析的檢測中。電化學(xué)檢測器也已用于檢測鄰氯青霉素、頭孢菌素和青霉素。

　　3、免疫法：

　　目前藥物殘留免疫分析技術(shù)主要分為兩大類：一為相對立的分析方法，即免疫測定法（immunoassays，IAs），如RIA、ELISA、固相免疫傳感器（soindphase immunosensor ）等；二是將免疫分析技術(shù)與常規(guī)理化分析技術(shù)聯(lián)用，如利用免疫分析的高選擇性作為理化測定技術(shù)中的凈化手段，典型的方式為免疫親合色譜（immunoaffinity chromatogrphy,IAC）。與常規(guī)的理化分析技術(shù)相比，免疫分析技術(shù)突出的優(yōu)點(diǎn)是操作簡單，速度快、分析成本低。以使用微量滴板的ELISA為例，免疫測定法取樣量小，前處理簡單、容量大，儀器化程度低，檢測奶與GC/MS或GC/ECD相似，可方便地達(dá)到ng/g～pg/g級，分析效率則為HPLC或GC的幾十倍以上。目前大部分抗生素已經(jīng)建立了免疫測定法，如磺胺二甲基嘧啶、氯霉素、沙拉沙星、鏈霉素、四環(huán)素、莫能菌素等。

　　免疫分析能與其他技術(shù)聯(lián)用。在聯(lián)用方法中，免疫分析技術(shù)既可作為HPLC或GC等測定技術(shù)的樣品凈化或分離手段，如IAC/HPLIAC/GC、HOIAC/HPLC；也可作為其離線或在線檢測方法，如HPLC/IA、TLC/IA、CZE/IA、SFC/IA、FIA/IA等，這些方法結(jié)合了免疫分析的選擇性、靈敏度與HPLC、GC等技術(shù)的高速、分離和準(zhǔn)確檢測能力，使分析過程簡化、分析成本下降，拓展了待測物范圍。在HPLC/IA等分析中，IA一般作為離線檢測方法。又稱免疫圖譜法（immunograms），適用于液相檢測器無響應(yīng)或分離困難的殘留組分的檢測。FIA/IA可以實(shí)現(xiàn)IA的動態(tài)、實(shí)時(shí)和自動檢測，分析速度快，已發(fā)展為一種門的免疫測定技術(shù)－FIIA。

      ELISA試劑盒是目前奶牛場和牛奶公司使用廣泛、快速、靈敏的檢測抗生素殘留的方法。外*各類抗生素試劑盒成本較高，如德拜發(fā)公司*的抗生素檢測試劑盒，一個(gè)96次檢測試劑盒要花3800元，每個(gè)樣品的檢測要花50元左右。天邁*的各類抗生素試劑盒相對來說成本較低，大約比進(jìn)口產(chǎn)品成本降低30-50%。

 

針對目前乳品供應(yīng)、收購以及乳品加工廠特點(diǎn)，杭州天邁推出“牛乳抗生素快速檢測系統(tǒng)”！

 

 

2.1 檢測時(shí)間短，5-10分鐘。

2.2 操作簡單，不需要人員。

2.3 檢測結(jié)果儀器自動判讀，避免人為失誤。

2.4 具有檢測卡拍照功能，檢測結(jié)果自動存儲，便于歷史檢測數(shù)據(jù)查詢。

2.5 可出具書面報(bào)告。

2.6 儀器檢測數(shù)據(jù)可上傳系統(tǒng)軟件。

2.7 根據(jù)客戶需要可增加抗生素檢測項(xiàng)目。

 

 

 

 

      TMYQ-CGR100金標(biāo)讀數(shù)儀是用于乳品中的抗生素及三聚氰胺等金標(biāo)試紙完成檢測反應(yīng)后，通過對磺胺等金標(biāo)試紙質(zhì)控線C、檢測線T顏色變化的檢測。通過對該顏色變化的檢測，可以半定量的分析出乳品中的抗生素、三聚氰胺等含量。避免人為判讀所造成的主觀。

      金標(biāo)讀數(shù)儀能夠快速、準(zhǔn)確地提供乳品中的抗生素、三聚氰胺等檢測項(xiàng)目的檢測結(jié)果，并可出具檢測報(bào)告，而且還可以把所有檢測數(shù)據(jù)建立數(shù)據(jù)庫，并可與軟件系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)對接；免維修、易操作；多功能、經(jīng)濟(jì)實(shí)用。穩(wěn)定的內(nèi)部校正，耐用的設(shè)計(jì)保證了連續(xù)可靠的使用。

1、部、省、市、縣、鎮(zhèn)各級農(nóng)產(chǎn)品檢測中心。

2、乳品養(yǎng)殖、供應(yīng)以及乳品加工企業(yè)。

3、各級主管部門：農(nóng)業(yè)部門、、食品藥品監(jiān)督管理局、畜牧獸醫(yī)部門等。

4、大型生鮮市場、超市。

 

1、檢測數(shù)據(jù)自動存儲；

2、檢測數(shù)據(jù)可打印中文檢測報(bào)告；

3、可對檢測卡進(jìn)行拍照保存，避免檢測數(shù)據(jù)作假；

4、可根據(jù)客戶需要增加沙丁胺醇、萊克多巴胺等檢測項(xiàng)目；

5、需客戶自備電腦一臺。