液相色譜儀的品牌、種類很多，各家的使用方法也不盡一樣，主要看你是那一款的液相色譜儀，當(dāng)初購買設(shè)備時，廠家的工程師會培訓(xùn)使用方法。液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。液相色譜-質(zhì)譜連用技術(shù)受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等；液相色譜-紅外光譜連用也發(fā)展很快如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類，海水中的不揮發(fā)烴類，使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。

液相色譜儀的使用方法：

內(nèi)容：

1  開機(jī)

1.1  打開電腦。

1.2  打開液相色譜各個模塊的電源。

1.3  雙擊桌面“儀器—聯(lián)機(jī)”，進(jìn)入聯(lián)機(jī)界面。

1.4  排氣：

1.4.1  手動旋開泵處沖洗閥（逆時針旋轉(zhuǎn)約1圈）。
1.4.2   右鍵單擊“泵”圖標(biāo)區(qū)域，選擇“方法…”選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫面，設(shè)流速：5ml/min（一般為3－5ml/min），點(diǎn)擊“確定”。

1.4.3  右鍵單擊“泵” 圖標(biāo)，點(diǎn)擊“控制…”選項(xiàng)，選中“ON”，點(diǎn)擊“確定”，則系統(tǒng)開始沖洗，直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無氣泡為止，（一般為5分鐘），切換通道繼續(xù)沖洗，直到所有要用通道無氣泡為止。

1.4.4  右鍵單擊“泵” 圖標(biāo)，點(diǎn)擊“方法…”選項(xiàng)，設(shè)流速：0ml/min，手動旋緊沖洗閥。

1.4.5  右鍵單擊“泵”圖標(biāo)，點(diǎn)擊“方法…”選項(xiàng)，按照方法要求選擇合適比例的流動相，設(shè)流速：1.0ml/min。

1.4.6  同理右鍵單擊“柱溫箱”，“檢測器”圖標(biāo)，點(diǎn)擊“方法…”選項(xiàng)，按照方法的要求設(shè)置溫度，波長，點(diǎn)擊“控制” 選項(xiàng)，“ON”打開柱溫箱和檢測器。

2  編輯方法

2.1  點(diǎn)擊“方法”－“編輯完整方法”開始編輯完整方法。

2.2  選中除“數(shù)據(jù)分析 ”外的三項(xiàng)，進(jìn)入下一選項(xiàng)卡。

2.3  方法信息：在“方法注釋”中加入方法的信息（如：This is for test！）。進(jìn)入下一選項(xiàng)卡。

2.4  泵參數(shù)設(shè)定：在“流速”處輸入流量， 如1.0ml/min，停止時間：如10 min（該停止時間僅為做一個樣品需要的時間），按照要求選擇合適比例的流動相配比，如乙腈：水＝75：25，A為水，B為乙腈，則設(shè)置B：75％即可。進(jìn)入下一選項(xiàng)卡。

2.5  自動進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)定： 選擇“洗針進(jìn)樣”----可以輸入進(jìn)樣體積和洗瓶位置，進(jìn)入下一選項(xiàng)卡。

2.6  柱溫箱參數(shù)設(shè)定： 在“溫度”下面的空白方框內(nèi)輸入所需溫度，如：40度。進(jìn)入下一選項(xiàng)卡。

2.7  UV檢測器參數(shù)設(shè)定： 在“波長”下方的空白處輸入所需的檢測波長，如254nm。點(diǎn)擊確定。

2.8   在“ 運(yùn)行時選項(xiàng)表 ”中，選中“ 數(shù)據(jù)采集”，點(diǎn)擊“確定”。
2.9  從“方法”菜單，選中“方法另存為…”，輸入一方法名，如“測試”，點(diǎn)擊“確定。

3  單次采集

3.1  從“運(yùn)行控制”菜單中，選擇“樣品信息”選項(xiàng)，選擇合適的路徑，在“數(shù)據(jù)文件”中選擇 “前綴/計數(shù)器”，輸入樣品瓶的位置，點(diǎn)擊“確定”。

3.2 基線平穩(wěn)后約10分鐘，從“運(yùn)行控制”菜單中選擇“運(yùn)行方法”。

4  多次數(shù)據(jù)采集

4.1  按照步驟2 編輯完整方法。

4.2  點(diǎn)擊“序列”－“序列表”，輸入“樣品瓶”“樣品名稱”，“進(jìn)樣次數(shù)”，選擇合適的“做樣方法”

4.3  點(diǎn)擊“序列”－“序列參數(shù)”，選擇序列數(shù)據(jù)的保存路徑（序列會自動生成以“序列名稱－時間”為名稱的文件夾保存數(shù)據(jù)），數(shù)據(jù)建議以選擇 “前綴/計數(shù)器”保存。

4.4  從“序列”菜單，選中“序列另存為…”，輸入一序列名，如“測試”，點(diǎn)擊“確定。

4.5  從“運(yùn)行控制”菜單中選擇“運(yùn)行序列”。

5  數(shù)據(jù)分析（脫機(jī)狀態(tài)使用）

5.1  雙擊“儀器 —脫機(jī)”圖標(biāo) 進(jìn)入的脫機(jī)畫面。

5.2  從“視圖”菜單中，點(diǎn)擊“數(shù)據(jù)分析”進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫面。

5.3  從“文件”菜單選擇“調(diào)用信號”，選中您的數(shù)據(jù)文件名。點(diǎn)擊“ 確定”，則數(shù)據(jù)被調(diào)出。（如預(yù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，應(yīng)先打開濃度較低的標(biāo)樣圖譜。）

5.4  做譜圖優(yōu)化：從“圖形”菜單中選擇“信號選項(xiàng)”。從“范圍” 中選擇“滿量程” 或“自動量程” 及合適的時間范圍或選擇“自定義量程” 調(diào)整。反復(fù)進(jìn)行，直到圖的比例合適為止。點(diǎn)擊“ 確定”。

6  積分：

6.1  從“積分”菜單中選擇“積分事件”選項(xiàng)，選擇合適的“斜率靈敏度”，“峰寬”，“zui小峰面積”，“zui小峰高”。點(diǎn)擊 ，自動加載積分參數(shù)。

6.2  點(diǎn)擊左邊“√”圖標(biāo)，將積分參數(shù)存入方法并退出“積分事件”。

6.3  如積分結(jié)果不理想，則修改相應(yīng)的積分參數(shù)，直到滿意為止。

7  標(biāo)準(zhǔn)曲線

7.1  點(diǎn)擊“校正”－“校正設(shè)置”，輸入“含量單位”。

7.2  點(diǎn)擊“校正”－“新建校正表”，點(diǎn)擊確定。輸入“化合物名稱”和“含量”，點(diǎn)擊“確定”，按照提示刪除其他組分。

7.3  至此完成單級校正，如要增加校正級別，應(yīng)從“文件”菜單選擇“調(diào)用信號”，選中您的數(shù)據(jù)文件名（第二個標(biāo)樣），點(diǎn)擊“校正”－“添加級別”，點(diǎn)擊確定，輸入“含量”，依次增加校正級別。

8  打印報告

8.1   從“報告”菜單中選擇“設(shè)定報告”選項(xiàng)，點(diǎn)擊“定量結(jié)果”框中“定量”右側(cè)的黑三角，選中“外標(biāo)法”，其它選項(xiàng)不變，點(diǎn)擊“ 確定”。

8.2  從“報告”菜單中選擇“打印報告”，則報告結(jié)果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機(jī)上，則點(diǎn)擊“報告” 底部的“打印”鈕。

8.3  點(diǎn)擊“文件”－“另存為”－“方法”，把數(shù)據(jù)分析方法保存，下次分析可直接在“文件”－“調(diào)用”－“方法”下，將該方法調(diào)出使用。（調(diào)用的方法中含有積分方法，標(biāo)準(zhǔn)曲線方法和打印報告方法）

9  關(guān)機(jī)

9.1  關(guān)機(jī)前，先關(guān)紫外燈，用相應(yīng)的溶劑（甲醇或乙腈）充分沖洗系統(tǒng)大約30分鐘。（色譜柱zui終應(yīng)保存在甲醇或乙腈中）

9.2  退出化學(xué)工作站，依提示關(guān)泵，及其它窗口，關(guān)閉計算機(jī)。

9.3 關(guān)閉Agilent 1260各模塊電源開關(guān)。

10  其它注意事項(xiàng)

10.1 當(dāng)樣品運(yùn)行時，切勿打開自動進(jìn)樣器前遮蓋，否則進(jìn)樣過程停止。

10.2 系統(tǒng)發(fā)生漏液時，機(jī)器會檢測到并停止進(jìn)樣，狀態(tài)指示燈為紅色。檢查擦干并安置好漏液處，擦干漏液傳感器，單擊ON按鈕，系統(tǒng)重新初始化。

10.3 注意紫外燈使用壽命，切勿來回開關(guān)紫外燈。

液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合，HPLC所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能，能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展，有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離HPLC成為解決生化分析問題zui有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用，流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn)，因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域。

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