人結(jié)腸癌細胞的培養(yǎng)方法及應(yīng)用！

人結(jié)腸癌細胞的培養(yǎng)方法及應(yīng)用！

HCT116是1979年M.Brattain等從患結(jié)腸癌的男性病人中分離的三株惡性細胞之一。 在半固體瓊脂糖培養(yǎng)基中形成克隆。HCT116在無胸腺的裸鼠有致瘤性，形成上皮樣的腫瘤。

一、細胞簡介

平臺編號：bio-73037

規(guī)格：5×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

拉丁屬名：HCT 116

細胞名稱： HCT 116（人結(jié)腸癌細胞）

種屬： 人

年齡（性別）： 男；成年 組織來源 結(jié)直腸癌

生長特性： 貼壁

細胞形態(tài)： 上皮細胞樣

背景描述： HCT 116細胞是由M·Brattain等人于1979年從患結(jié)腸癌的男性病人中分離的三株惡性細胞中的一株。HCT 116細胞在半固體瓊脂糖培養(yǎng)基中形成克?。籋CT 116細胞在無胸腺裸鼠有致瘤性，形成腫瘤結(jié)節(jié)。

生長培養(yǎng)基 ：McCoy’s 5A(貨號:PM150710)＋10% FBS(貨號:164210-500)＋1% P/S(貨號:PB180120)

培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃

用途：提供用于科研的穩(wěn)定細胞系。

運輸：凍存的細胞干冰運輸，復(fù)蘇的細胞冰袋運輸。

二、HCT 116（人結(jié)腸癌細胞）培養(yǎng)條件：

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640培養(yǎng)基（不含Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗+800ng/ml Taxol

2、溫度：37.0°C

3、氣體：空氣 95%，CO2 5%

三、HCT 116（人結(jié)腸癌細胞）培養(yǎng)方法：

收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：

如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，留10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

如果細胞已長滿（達80-90%）。即可進行傳代，具體步驟如下：

1、棄去培養(yǎng)液，用PBS洗1-2次。

2、向瓶內(nèi)加入1.0-2.0ml液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取，加含有6ml 含10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細胞。

3、加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4、傳代比例：1:2-1:3

溫馨提示：培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)液是加入高藥物濃度的，為800ng/ml。我們采取緩慢增加藥物的梯度的方法。具體步驟是，首先加含200ng/mlTaxol藥物的培養(yǎng)液，放入培養(yǎng)箱，這段時間會有小部分細胞懸浮起來，屬于正常情況，通過換液可以去掉，等細胞待長滿就可以消化傳代了，這時可以一直用含藥物培養(yǎng)液來消化培養(yǎng)細胞，一兩代之后就可以將藥物濃度提高到500ng/ml，兩代后可以將藥物濃度提高至高水平800ng/ml，含藥物培養(yǎng)液用于細胞培養(yǎng)都沒有問題，凍存的時候就不要在凍存液里加藥物了。

四、HCT 116（人結(jié)腸癌細胞）保存和應(yīng)用：

客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。

五、HCT 116（人結(jié)腸癌細胞）復(fù)蘇的原則：

在實際操作中，凍存細胞要進行復(fù)蘇，再培養(yǎng)傳代。復(fù)蘇細胞一般采用快速融化法。以保證細胞外結(jié)晶快速融化，以避免慢速融化水分滲入細胞內(nèi)，再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細胞。

如何選購優(yōu)質(zhì)的HCT 116（人結(jié)腸癌細胞）？

1）該細胞只能用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。

2）收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

3）仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等。

4）用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過夜，隔天再取出觀察。此時多數(shù)細胞均會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常，請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細胞無活力，請拍下照片及時和我們聯(lián)系，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。

5）請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件：建議直接購買我司提供的*培養(yǎng)基。

6）建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。

微生物菌種查詢網(wǎng)自設(shè)細胞系板塊，是細胞株提供中心,專業(yè)提供代次低、周期短、活性好的細胞株。與國內(nèi)外多家研制單位，生物醫(yī)藥，第三方檢測機構(gòu)，科研院所有著良好穩(wěn)定的*合作關(guān)系！歡迎廣大客戶來詢！