還原型（GSH）檢測試劑盒2
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- 公司名稱 上海貝博生物科技有限公司
- 品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2024/11/11 7:19:36
- 訪問次數(shù) 109
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保存溫度
2-8℃ 避光
注意事項
開蓋后組份按要求條件保存。
有效期
6個月
檢測方法
微孔板，酶標儀
適用樣本
血清血漿/全血/組織
產(chǎn)品應用
微孔板，酶標儀
儀器準備
1.酶標儀
2.離心機
2.離心機
試劑準備
1.雙蒸水
耗材準備
1.一次性手套
2.吸頭
2.吸頭
使用注意事項
1.血液中的GSH幾乎全部存在于紅細胞內(nèi)，可以用每升全血中GSH的克數(shù)來表示，也可用每克Hb中GSH含量來表示；
2.計算時應用消光系數(shù)，故比色計要校正波長。用標準管計算較方便、準確；
3.吸取上清時，用帶刻度的5ml滴管，或者移液器，避開表面的一層薄膜，插到上清液中吸取2ml做顯色反應；
4.每批實驗做2個標準管、空白管，以減少操作誤差；
2.計算時應用消光系數(shù)，故比色計要校正波長。用標準管計算較方便、準確；
3.吸取上清時，用帶刻度的5ml滴管，或者移液器，避開表面的一層薄膜，插到上清液中吸取2ml做顯色反應；
4.每批實驗做2個標準管、空白管，以減少操作誤差；
使用方法
試劑工作液配制 ：
1. 試劑A為過飽和溶液，如有結(jié)晶，則取上清使用；
2. GSH標準溶劑工作液：
溶劑儲備液：雙蒸水=1：9稀釋，即為GSH標準溶劑工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。
3. 1mmol/LGSH標準溶液的配制：GSH分子量為307，每次測定前將3.07 mg的GSH標準品加到10mlGSH的溶劑工作液中，混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。
4. 20μmol/LGSH標準溶液的配制:取1mmol/LGSH標準溶液0.2ml加GSH標準溶劑工作液9.8ml，現(xiàn)用現(xiàn)配。
樣本的前處理：
1. 培養(yǎng)細胞：將收集好的細胞，用PBS清洗1~2次，低速離心收集沉淀細胞，再加入0.3-0.5ml 0.1M pH7.4的等滲PBS緩沖液重懸細胞，超聲或手動研磨破碎細胞后待測；
上清液制備：
取破碎后的細胞懸液0.1ml,加0.1ml試劑A混勻，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘， 取上清液1ml待測；
2. 血清（漿）：取0.05ml,加試劑A0. 2ml混勻，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘， 取上清液待測；
3. 全血樣本的處理：1:9溶血液的制備：取0.1ml肝素抗凝全血加雙蒸水0.9ml，充分混勻，直至透亮為止；
上清液制備：取0.05ml,加試劑A0. 2ml混勻，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘， 取上清液待測；
4. 組織樣本：10%勻漿液的制備：準確稱取組織重量，按重量（g）：體積（ml）=1:9比例加入9倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下機械勻漿，2500轉(zhuǎn)/分，離心10min，取上清液待測；
上清液制備：取0.1ml,加0. 1ml試劑A 0. 1ml混勻，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘， 取上清液待測；
計算：
（1）全血計算公式：
全血中GSH含量 = 測定OD值 – 空白OD值 x 標準品濃度 x 樣本前處理 x 樣本測定前
（umol/L） 標準OD值 - 空白OD值 （20umol/L） 稀釋倍數(shù)（5倍）稀釋倍數(shù)（10倍）
（2）細胞及組織計算公式：
GSH含量 = 測定OD值 – 空白OD值 x 標準品濃度 x樣本前處理 ÷ 待測勻漿蛋白
（umol/gprot） 標準OD值 - 空白OD值 （20umol/L） 稀釋倍數(shù)（2倍） 濃度（gprot/L）
（3）血清（漿計算公式）
GSH含量 = 測定OD值 – 空白OD值 x 標準品濃度 x樣本前處理
（umol/L） 標準OD值 - 空白OD值 （20umol/L） 稀釋倍數(shù)（5倍）
1. 試劑A為過飽和溶液，如有結(jié)晶，則取上清使用；
2. GSH標準溶劑工作液：
溶劑儲備液：雙蒸水=1：9稀釋，即為GSH標準溶劑工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。
3. 1mmol/LGSH標準溶液的配制：GSH分子量為307，每次測定前將3.07 mg的GSH標準品加到10mlGSH的溶劑工作液中，混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。
4. 20μmol/LGSH標準溶液的配制:取1mmol/LGSH標準溶液0.2ml加GSH標準溶劑工作液9.8ml，現(xiàn)用現(xiàn)配。
樣本的前處理：
1. 培養(yǎng)細胞：將收集好的細胞，用PBS清洗1~2次，低速離心收集沉淀細胞，再加入0.3-0.5ml 0.1M pH7.4的等滲PBS緩沖液重懸細胞，超聲或手動研磨破碎細胞后待測；
上清液制備：
取破碎后的細胞懸液0.1ml,加0.1ml試劑A混勻，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘， 取上清液1ml待測；
2. 血清（漿）：取0.05ml,加試劑A0. 2ml混勻，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘， 取上清液待測；
3. 全血樣本的處理：1:9溶血液的制備：取0.1ml肝素抗凝全血加雙蒸水0.9ml，充分混勻，直至透亮為止；
上清液制備：取0.05ml,加試劑A0. 2ml混勻，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘， 取上清液待測；
4. 組織樣本：10%勻漿液的制備：準確稱取組織重量，按重量（g）：體積（ml）=1:9比例加入9倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下機械勻漿，2500轉(zhuǎn)/分，離心10min，取上清液待測；
上清液制備：取0.1ml,加0. 1ml試劑A 0. 1ml混勻，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘， 取上清液待測；
計算：
（1）全血計算公式：
全血中GSH含量 = 測定OD值 – 空白OD值 x 標準品濃度 x 樣本前處理 x 樣本測定前
（umol/L） 標準OD值 - 空白OD值 （20umol/L） 稀釋倍數(shù)（5倍）稀釋倍數(shù)（10倍）
（2）細胞及組織計算公式：
GSH含量 = 測定OD值 – 空白OD值 x 標準品濃度 x樣本前處理 ÷ 待測勻漿蛋白
（umol/gprot） 標準OD值 - 空白OD值 （20umol/L） 稀釋倍數(shù)（2倍） 濃度（gprot/L）
（3）血清（漿計算公式）
GSH含量 = 測定OD值 – 空白OD值 x 標準品濃度 x樣本前處理
（umol/L） 標準OD值 - 空白OD值 （20umol/L） 稀釋倍數(shù)（5倍）
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