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          科學(xué)儀器

            Invitrogen No-Stain 蛋白標(biāo)記試劑提供了一種靈活、準(zhǔn)確、快速和可靠的方法,用于可視化和歸一化凝膠或膜上的蛋白(轉(zhuǎn)印后)。它在 10 分鐘內(nèi)與凝膠或膜上的蛋白形成共價鍵,無需任何去染色步驟,并且可以使用任何常用的成像儀立即實(shí)現(xiàn)可視化。No-Stain 試劑不需要任何特定凝膠或其他試劑,并且與凝膠染色和 western 印跡工作流程兼容。

            凝膠蛋白持續(xù)可視化
            考馬斯和其他凝膠染色及去染色步驟非常耗時且繁瑣。No-Stain 蛋白標(biāo)記試劑在 10 分鐘內(nèi)與凝膠中的所有蛋白上的賴氨酸氨基酸側(cè)鏈形成共價鍵。由于賴氨酸是的氨基酸之一,No-Stain 試劑可檢測凝膠或膜上的所有蛋白,并且從共價鍵合試劑發(fā)射出的強(qiáng)信號具有納克級的靈敏度。

            ?替代傳統(tǒng)凝膠染色試劑—能夠在廣泛的蛋白裂解液濃度范圍內(nèi)提供更準(zhǔn)確的歸一化 (1–80 µg)
            ? 靈敏—檢測下限為 20 ng/條帶
            ? 特異性—僅與蛋白的賴氨酸側(cè)鏈結(jié)合成鍵。未結(jié)合的試劑不會發(fā)射熒光,因此具有信噪比
            ? 靈活—無需更換凝膠即可便利地進(jìn)行無需染色的操作。No-Stain 試劑無需染色,可使用任何凝膠類型(預(yù)制或手灌膠)

            獲得用于定量 Western 印跡的金標(biāo)準(zhǔn)
            蛋白歸一化是獲得可靠且可重現(xiàn)的定量 Western 印跡的關(guān)鍵步驟。總蛋白歸一化被視為定量 Western 印跡的金標(biāo)準(zhǔn)。許多主流期刊已經(jīng)制定了提交 Western 印跡研究的指南,指南中的相關(guān)引文展示如下。

            ?“為進(jìn)行定量比較,應(yīng)使用適當(dāng)?shù)脑噭φ掌泛途哂芯€性信號轉(zhuǎn)導(dǎo)范圍的成像方法” – 性質(zhì)
            ? “記錄如何獲得數(shù)據(jù)、信號強(qiáng)度是否與抗原上樣呈線性關(guān)系以及如何歸一化蛋白上樣量” – Journal of Biological Chemistry
            ? “將信號強(qiáng)度歸一化至總蛋白上樣量(通過染色膜對總蛋白進(jìn)行評估)(如果可能)” – Journal of Biological Chemistry
            ? “在沒有證據(jù)證明操作步驟不會影響表達(dá)時不應(yīng)使用管家蛋白” – Journal of Biological Chemistry

            準(zhǔn)確的上樣對照應(yīng)在所有實(shí)驗條件下顯示信號強(qiáng)度與樣品上樣量之間的線性關(guān)系。通過使用 No-Stain 試劑標(biāo)記膜上總蛋白獲得的信號強(qiáng)度,就可在所有實(shí)驗條件下,確保與樣品上樣量呈線性關(guān)系(參見下圖)。因此,在定量 Western 印跡應(yīng)用中使用 No-Stain 試劑可以使用總蛋白作為理想上樣對照。

            ?易于使用方案—可在 10 分鐘內(nèi)在硝酸纖維素或 PVDF 膜上進(jìn)行蛋白標(biāo)記
            ? 快速可視化使用具有 UV 或熒光光源的廣泛成像儀
            ? 準(zhǔn)確的總蛋白質(zhì)歸一化


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