詳細(xì)介紹
【原理】
本試劑采用ELISA方法用于犬糞便中包蟲抗原的檢測。
【試劑組成】
1.預(yù)包被板 | 48T/96T; | | 7. 樣本稀釋液(5號液) | 1支; |
2.酶結(jié)合物(1號液) | 1支; | | 8. 終止液(6號液) | 1支; |
3.濃縮洗滌液(2號液) | 1支; | | 9. 陽性對照品 | 1支; |
4.底物(3號液) | 1支; | | 10.陰性對照品 | 1支; |
5.顯色劑(4號液) | 1支; | | 11.不干膠膜 | 1/2片; |
6.2X濃縮糞便處理液 (7號液,用前以蒸餾水等體積稀釋) | 1支; | | 12.自封袋 | 1個(gè); |
13.使用說明書 | 1份 |
【操作程序】
1. 樣品處理 犬糞樣品需要預(yù)先低溫(-70℃以下)冷凍7天以上,以滅活蟲卵。稱取1克犬糞,加入1ml已稀釋的糞便處理液,充分?jǐn)嚢杌靹颍o置10分鐘,再經(jīng)5000rpm離心30分鐘,取上清液檢驗(yàn)。
2. 洗滌液配制 用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液(2號液)按1:10稀釋,如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水充分混勻即為工作洗滌液。
3. 加樣反應(yīng) 每次試驗(yàn)設(shè)陰性對照2孔、陽性及空白對照各1孔;其中陰、陽對照孔分別加入陰性、陽性對照各100ul,空白對照孔加入樣品稀釋液(5號液)2滴。其它各樣本檢測孔先滴加樣品稀釋液(5號液)各1滴,再取犬糞上清液50ul加入板孔中。37℃下避光反應(yīng)30分鐘,甩去孔內(nèi)液體。用已稀釋的洗滌液洗滌4次,每次靜止1分鐘,拍干。
4. 加酶反應(yīng) 除空白孔外,各孔加酶結(jié)合物2滴。37℃下避光反應(yīng)30分鐘,甩去孔內(nèi)液體。用已稀釋的洗滌液 洗滌3次,每次靜止1分鐘,拍干。
5. 顯色反應(yīng) 加底物液(3號液)和顯色劑(4號液)各1滴,混勻,37℃避光顯色10分鐘。加終止液(6號液)1滴,終止反應(yīng)(加終止液后,藍(lán)色會變?yōu)辄S色)并判讀結(jié)果。
【結(jié)果判斷】
陰性對照呈無色或淺黃色,陽性對照呈明顯黃色,表示試驗(yàn)有效。
以空白對照調(diào)零,用酶標(biāo)儀于450nm(630nm作參比波長)讀取吸光度(A值)。待檢孔A值大于陰性對照A值平均值的3.1倍者判為陽性。如陰性對照A值的平均值低于0.10時(shí)按0.10計(jì)算。
【注意事項(xiàng)】
1.試劑盒于2-8℃保存,有效期12個(gè)月。每次使用前應(yīng)先平衡至室溫。
2.未使用完的板條應(yīng)密封保存。
3.試劑盒中終止液具有腐蝕性,要小心使用。
4.瓶蓋每次使用后要擰緊,各瓶蓋之間不可混用。不同批號試劑盒的試劑組分不可混用。
5.應(yīng)采集新鮮的犬糞樣本進(jìn)行測試。若不能及時(shí)檢測,應(yīng)將糞樣放置低溫凍存,防止腐敗或反復(fù)凍融。如犬糞難以溶解,應(yīng)適當(dāng)搗碎處理。任何樣本都應(yīng)作為傳染源來處理。
6.37℃孵育時(shí),建議使用水浴箱。如無條件,可使用濕盒放入溫箱并同時(shí)用不干膠膜封蓋板孔。
7.濃縮洗滌液及濃縮糞便處理液若出現(xiàn)結(jié)晶時(shí),應(yīng)置37℃至溶解。