• 將各種試劑移到室溫（18－25℃）平衡半小時(shí)，取一瓶20×洗液，加蒸餾水至600ml，混勻后備用。
   
• 將測(cè)HBsAg酶聯(lián)板從密封袋中取出，設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，兩個(gè)陽(yáng)性對(duì)照孔，兩個(gè)陰性對(duì)照孔。取陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照分別充分混勻后各50μl加入對(duì)照孔中，其余每個(gè)孔加待檢血清50μl，除空白孔以外，每孔加酶結(jié)合物50μl，充分混勻，用不干膠封片封蓋酶聯(lián)板，37℃溫育60分鐘。
   
• 棄去各孔內(nèi)液體，洗板5次，每次靜置15－20秒，拍干。
   
• 每孔加顯色劑A50μl，顯色劑B50μl，輕輕振蕩后置37℃暗處顯色10分鐘，每孔加終止液50μl。
   
• 選擇酶標(biāo)儀波長(zhǎng)450nm，參考波長(zhǎng)630nm，測(cè)定各孔A值。

Cutoff值＝2 .1× N （N為陰性對(duì)照平均A值，如小于0.05按0.05計(jì)算）

• 陽(yáng)性對(duì)照平均A值應(yīng)大于0.50。陰性對(duì)照平均A值應(yīng)小于0.10，否則實(shí)驗(yàn)不成立。
   
• 標(biāo)本A值小于Cutoff值為陰性，大于等于Cutoff值為陽(yáng)性。