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當(dāng)前位置:研域(上海)化學(xué)試劑有限公司>>技術(shù)文章>>研域課堂:原代細(xì)胞的培育辦法
1、安排塊培育法
(1)依照前述辦法取材,將安排剪成或切成1mm3巨細(xì)的小塊,并參加少許培育基使安排濕潤。
(2)將小塊均勻涂布于瓶壁,每小塊距離0.2 cm~0.5cm,一般在25mL培育瓶(底面積為17.5cm2)可接種20~30小塊為宜,小塊放置后,輕輕翻轉(zhuǎn)培育瓶,使瓶底朝上,然后于瓶內(nèi)參加適量培育基蓋好瓶塞,將瓶歪斜放置在37℃溫箱內(nèi)。
(3)培育2~4小時(shí),待小塊貼附后,將培育瓶緩慢翻轉(zhuǎn)平放,靜置培育,動(dòng)作要輕,嚴(yán)禁搖擺和來回振動(dòng),以防因?yàn)榧?dòng)而使小塊漂起而造成培育失敗,若安排塊不易貼壁可預(yù)先在瓶壁涂一薄層血清、胎汁或鼠尾膠原等。
2.消化培育法
該辦法是選用前述的消化渙散法,將阻礙細(xì)胞成長的細(xì)胞間質(zhì)(包含基質(zhì)、纖維等)去除,使細(xì)胞渙散形成細(xì)胞懸液,然后分瓶培育。
3.懸浮細(xì)胞培育法
關(guān)于懸浮成長的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和**細(xì)胞無需消化,可選用低速離心分離,直接培育,或經(jīng)細(xì)胞分層液分離后接種培育。
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