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當前位置:研域(上海)化學試劑有限公司>>技術文章>>研域課堂:原代細胞的培育辦法
1、安排塊培育法
(1)依照前述辦法取材,將安排剪成或切成1mm3巨細的小塊,并參加少許培育基使安排濕潤。
(2)將小塊均勻涂布于瓶壁,每小塊距離0.2 cm~0.5cm,一般在25mL培育瓶(底面積為17.5cm2)可接種20~30小塊為宜,小塊放置后,輕輕翻轉培育瓶,使瓶底朝上,然后于瓶內參加適量培育基蓋好瓶塞,將瓶歪斜放置在37℃溫箱內。
(3)培育2~4小時,待小塊貼附后,將培育瓶緩慢翻轉平放,靜置培育,動作要輕,嚴禁搖擺和來回振動,以防因為激動而使小塊漂起而造成培育失敗,若安排塊不易貼壁可預先在瓶壁涂一薄層血清、胎汁或鼠尾膠原等。
2.消化培育法
該辦法是選用前述的消化渙散法,將阻礙細胞成長的細胞間質(包含基質、纖維等)去除,使細胞渙散形成細胞懸液,然后分瓶培育。
3.懸浮細胞培育法
關于懸浮成長的細胞,如白血病細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和**細胞無需消化,可選用低速離心分離,直接培育,或經細胞分層液分離后接種培育。
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