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        1. 上海易佰聚經(jīng)貿(mào)有限公司
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          無內(nèi)毒素小量質(zhì)粒提取試劑盒 詳細(xì)資料

          時間:2013-1-5閱讀:754
          分享:

           佰易聚生物商城提供的分子生物學(xué)試劑和試劑盒、美國聯(lián)合碳化和美國光譜醫(yī)學(xué)透析袋、培養(yǎng)基和培養(yǎng)耗材、細(xì)胞因子和細(xì)胞分離液、抗體和elisa試劑盒及常用生物試劑等,大量現(xiàn)貨火爆*,歡迎登錄www.ebioeasy.com或者,,洽談選購!

          英文名稱:EndoFree plasmid mini kit     

          中文名稱 :無內(nèi)毒素小量質(zhì)粒提取試劑盒

          編號:PD1212-01

          規(guī)格:  50 次

          品牌:biomiga

          說明 :

          無內(nèi)毒素質(zhì)粒小提試劑盒說明:1~15 mL菌液中提取30~70 μg無內(nèi)毒質(zhì)粒DNA

          試劑盒組分:
           
          Catalog #
          PD1212-01
          Preps
          50
          ezBind Columns
          50
          Buffer A1
          25 mL
          Buffer B1
          25 mL
          Buffer N3
          30 mL
          Buffer KB
          30 mL
          DNA Wash Buffer*
          15 mL
          EndoClean Buffer
          10 mL
          Endofree Eluiton Buffer
          10 mL
          RNase A(20 mg/mL)
          2.5 mg(125µL)
          User Manual
          1
           
          保存條件:
           
          RNAse A在4℃下可以保存一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它組分室溫保存。
           
          注意事項:
          1. 質(zhì)粒拷貝數(shù): 純化中低拷貝的質(zhì)粒時,使用2倍的菌液體積,2倍的Buffer A1,B1,N3,相同體積的Wash Buffer和Endofree Elution Buffer .
          2. 轉(zhuǎn)化菌: 若為-70oC甘油凍存的菌,請先涂布平板培養(yǎng)后,再重新挑選新的單個菌落進(jìn)行培養(yǎng)。
          3. 切勿直接取凍存的菌種進(jìn)行培養(yǎng)。
          操作簡明步驟:
          1. 接種新鮮的單個菌落到3-12 mL的LB培養(yǎng)基 (含適量抗生素),37oC震蕩培養(yǎng)14-16小時。
          2. 室溫下10,000 x g離心1分鐘,收集菌體,并盡可能的吸去上清。
          3. 加入450 µL Buffer A1 確保已加入RNase A),用移液器或渦流震蕩確保菌體充分懸浮。
          4. 加入 450 µL Buffer B1, 輕輕地反轉(zhuǎn)5-10 次以混合均勻,然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。 
          5. 加入100 µL Buffer N3, 立即反轉(zhuǎn)5次,用手用力搖晃3-5次充分混勻,此時出現(xiàn)白色絮狀沉淀。
          6. 將離心管轉(zhuǎn)至高速離心機(jī),在室溫下13,000 rpm離心10分鐘若上清中仍有白色沉淀,可翻轉(zhuǎn)后再次離心5分鐘。
          7. 定量吸取離心后的上清液至新的1.5mL管中,加入0.1 volume的EndoClean Buffer,混勻后冰浴10分鐘,其間不時搖勻EndoClean Buffer粘稠難吸,可將槍頭剪掉頭后再吸取。
          8. 室溫下冰浴取出后務(wù)必使溶液溫度恢復(fù)到23oC以上,否則溶液不分層,為保證分層效果,可直接在65oC溫育5分鐘13,000 rpm離心10分鐘。此時溶液分為兩層,上層水相含有質(zhì)粒,下層紅色有機(jī)相含有無內(nèi)毒素。
          9. 將上層水相轉(zhuǎn)移至一個新的2.0 mL管中,加入450 µL的Buffer N3及400 µL的100% ethonal,用手用力甩3次以混勻。
          10. 將溶液700 µL轉(zhuǎn)移至帶有收集管的DNA柱中,室溫下13,000 rpm 離心20秒,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)此步驟至全部溶液轉(zhuǎn)移至DNA柱中。
          11. 可選: 向DNA柱中加入 500 µL Buffer KB, 室溫下13,000 rpm 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。
          12. 向離心柱中加入650 µL DNA Wash Buffer 確保已加入無水乙醇,室溫下,13,000 rpm 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)步驟“12”。
          13. 將離心柱放回高速離心機(jī)中,13,000 rpm室溫下開蓋離心2分鐘,以*去除殘留的乙醇。
          14. 將離心柱轉(zhuǎn)至一個新的1.5 mL離心管中,向DNA柱的正中間加入50~100 µL (體積>50 µL) 的Endofree Elution Buffer,洗脫質(zhì)粒DNA。將離心管中的洗脫液再次加到DNA柱的正中間,室溫放置1分鐘,13,000 rpm 離心1分鐘,收集洗脫液到同一個離心管中。

          操作流程:

                     

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