佰易聚生物商城提供的分子生物學(xué)試劑和試劑盒、美國聯(lián)合碳化和美國光譜醫(yī)學(xué)透析袋、培養(yǎng)基和培養(yǎng)耗材、細(xì)胞因子和細(xì)胞分離液、抗體和elisa試劑盒及常用生物試劑等,大量現(xiàn)貨火爆*,歡迎登錄www.ebioeasy.com或者,,洽談選購!
英文名稱:EndoFree plasmid mini kit
中文名稱 :無內(nèi)毒素小量質(zhì)粒提取試劑盒
編號:PD1212-01
規(guī)格: 50 次
品牌:biomiga
說明 : |
無內(nèi)毒素質(zhì)粒小提試劑盒說明:1~15 mL菌液中提取30~70 μg無內(nèi)毒質(zhì)粒DNA 試劑盒組分: Catalog # | PD1212-01 | Preps | 50 | ezBind Columns | 50 | Buffer A1 | 25 mL | Buffer B1 | 25 mL | Buffer N3 | 30 mL | Buffer KB | 30 mL | DNA Wash Buffer* | 15 mL | EndoClean Buffer | 10 mL | Endofree Eluiton Buffer | 10 mL | RNase A(20 mg/mL) | 2.5 mg(125µL) | User Manual | 1 | 保存條件: RNAse A在4℃下可以保存一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它組分室溫保存。 注意事項: - 質(zhì)粒拷貝數(shù): 純化中低拷貝的質(zhì)粒時,使用2倍的菌液體積,2倍的Buffer A1,B1,N3,相同體積的Wash Buffer和Endofree Elution Buffer .
- 轉(zhuǎn)化菌: 若為-70oC甘油凍存的菌,請先涂布平板培養(yǎng)后,再重新挑選新的單個菌落進(jìn)行培養(yǎng)。
- 切勿直接取凍存的菌種進(jìn)行培養(yǎng)。
操作簡明步驟: - 接種新鮮的單個菌落到3-12 mL的LB培養(yǎng)基 (含適量抗生素),37oC震蕩培養(yǎng)14-16小時。
- 室溫下10,000 x g離心1分鐘,收集菌體,并盡可能的吸去上清。
- 加入450 µL Buffer A1 (確保已加入RNase A),用移液器或渦流震蕩確保菌體充分懸浮。
- 加入 450 µL Buffer B1, 輕輕地反轉(zhuǎn)5-10 次以混合均勻,然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。
- 加入100 µL Buffer N3, 立即反轉(zhuǎn)5次,用手用力搖晃3-5次充分混勻,此時出現(xiàn)白色絮狀沉淀。
- 將離心管轉(zhuǎn)至高速離心機(jī),在室溫下13,000 rpm離心10分鐘(若上清中仍有白色沉淀,可翻轉(zhuǎn)后再次離心5分鐘)。
- 定量吸取離心后的上清液至新的1.5mL管中,加入0.1 volume的EndoClean Buffer,混勻后冰浴10分鐘,其間不時搖勻(若EndoClean Buffer粘稠難吸,可將槍頭剪掉頭后再吸取)。
- 室溫下(冰浴取出后務(wù)必使溶液溫度恢復(fù)到23oC以上,否則溶液不分層,為保證分層效果,可直接在65oC溫育5分鐘)13,000 rpm離心10分鐘。此時溶液分為兩層,上層水相含有質(zhì)粒,下層紅色有機(jī)相含有無內(nèi)毒素。
- 將上層水相轉(zhuǎn)移至一個新的2.0 mL管中,加入450 µL的Buffer N3及400 µL的100% ethonal,用手用力甩3次以混勻。
- 將溶液700 µL轉(zhuǎn)移至帶有收集管的DNA柱中,室溫下13,000 rpm 離心20秒,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)此步驟至全部溶液轉(zhuǎn)移至DNA柱中。
- 可選: 向DNA柱中加入 500 µL Buffer KB, 室溫下13,000 rpm 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。
- 向離心柱中加入650 µL DNA Wash Buffer (確保已加入無水乙醇),室溫下,13,000 rpm 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)步驟“12”。
- 將離心柱放回高速離心機(jī)中,13,000 rpm室溫下開蓋離心2分鐘,以*去除殘留的乙醇。
- 將離心柱轉(zhuǎn)至一個新的1.5 mL離心管中,向DNA柱的正中間加入50~100 µL (體積>50 µL) 的Endofree Elution Buffer,洗脫質(zhì)粒DNA。將離心管中的洗脫液再次加到DNA柱的正中間,室溫放置1分鐘,13,000 rpm 離心1分鐘,收集洗脫液到同一個離心管中。
操作流程: |