肌球蛋白樹(shù)立結(jié)構(gòu)緊湊的創(chuàng)新性設(shè)計(jì)新標(biāo)準(zhǔn)
肌球蛋白輕鏈擁有自己的肽鏈，這點(diǎn)與重鏈不同。它們不被包括在肌球蛋白家族中，但對(duì)形成肌球蛋白酶催化超分子復(fù)合體有重要作用。
肌球蛋白是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。肌球蛋白實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。目前我們對(duì)客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務(wù)。肌球蛋白存在于橫紋肌肌原纖維的粗絲中，也存在于平滑肌中，在肌肉運(yùn)動(dòng)中起重要作用，心肌細(xì)胞損傷越嚴(yán)重，血清CMLC水平越高。
肌球蛋白用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過(guò)夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌，同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔。肌球蛋白加酶標(biāo)抗體于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。肌球蛋白加底物液顯色于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。肌球蛋白終止反應(yīng)于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。肌球蛋白因其免疫學(xué)的特異性強(qiáng)，所以CMLC的測(cè)定是迄今為止診斷AMI和研究心肌損傷及保護(hù)較特異的生化指標(biāo)。
肌球蛋白結(jié)果判定可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。肌球蛋白是肌肉結(jié)構(gòu)蛋白的一種，分子量480000，由兩條重鏈(分子量200 000)及四條輕鏈(兩條L2，分子量18 000，L1、L3分子量分別為16 000、25 000)組成，分子構(gòu)型如豆芽狀。兩條重鏈的大部分互相繞成雙螺旋狀，構(gòu)成豆芽的莖部；總鏈的其余部分與輕鏈一起構(gòu)成豆芽的豆瓣部分。
