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競爭分析作圖法實驗原理
閱讀：823 發(fā)布時間：2010-11-24確定2種單克隆抗體是否結合蛋白質(zhì)抗原上同一位點的zui簡便的方法是競爭分析法。該方法可確定一種抗體是否對另一種抗體與某一位點的結合具有抑制作用。如果兩者相互競爭，說明2種抗體識別相同位點或同一蛋白質(zhì)的空間折疊結構域。相反，如果2種抗體與抗原結合無相互競爭抑制作用，能夠同時與抗原結合，說明2種抗體具有不同的特異性，所識別的抗原表位也不同）。
競爭試驗
競爭分析法對單克隆抗體的特異性分析zui為有用，而多克隆抗血清可識別多種不同的位點，故不宜用此法分析。檢測抗原與抗體間相互競爭結合試驗的方法較多，但其中至少必須應有一種抗體被直接標記，同時對抗體所結合的抗原經(jīng)過純化。其中ElISA方法zui常用，檢測用的抗體可用生物素化標記（Wagener等1984）。在Wagener的試驗中，主要是為了檢測2個新的單克隆抗體XHl和XH2，與已知的抗YFPl抗體ZO-1競爭結合目的抗原YFPl。首先，將抗原蛋白質(zhì)YFPl包被96孔酶標板，直接測定以確定所有抗體是否具有活性，并均能與包被抗原進行反應。還必須事先測定抗體的滴度，以確定競爭試驗的zui敏感條件。隨后還應檢測未標記的抗體XHl、XH2和ZO-1分別與生物素標記的ZO-1競爭性與抗原YFPl結合的能力。