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構(gòu)建手足口病相關(guān)病毒的感染性克隆
閱讀:511 發(fā)布時間:2012-3-24近日,學(xué)術(shù)刊物Virology Journal發(fā)表了中國科學(xué)院上海巴斯德研究所關(guān)于構(gòu)建手足口病相關(guān)的柯薩奇病毒A16型(coxsackievirus A16,CVA16)感染性克隆的研究成果。
手足口病是5歲以下兒童中發(fā)生的常見傳染病,僅2010年和2011年,全國共有3,394,375例感染,其中死亡1414例,對于兒童的健康成長造成嚴(yán)重威脅,但目前尚無針對手足口病的預(yù)防性疫苗或治療性藥物。
CVA16和人腸道病毒71型(enterovirus 71,EV71)是引起手足口病的主要病原體,因此,了解CVA16和EV71基因組中各個區(qū)域的功能,對加強(qiáng)CVA16和EV71的病毒學(xué)和免疫學(xué)研究,盡快研制出有效的預(yù)防和治療方法,保障中國兒童的生命健康有非常重要的意義。然而,EV71和CVA16均屬于RNA病毒,直接對它們的基因組進(jìn)行遺傳操作非常困難。
上海巴斯德所研究生劉菲、劉慶偉、蔡一村等在黃忠研究員指導(dǎo)下,通過分子生物學(xué)手段,提取了CVA16病毒的基因組RNA,并且進(jìn)行體外反轉(zhuǎn)錄操作獲得與病毒基因組相對應(yīng)的cDNA序列,將此序列構(gòu)建到一個表達(dá)載體中,獲得攜帶感染性cDNA克隆的質(zhì)粒。利用該質(zhì)??梢园b出具有感染性的拯救病毒。通過觀察細(xì)胞病變、蛋白質(zhì)印跡以及免疫熒光等方法證實,拯救病毒與野生病毒的功能*一致。同時,測序結(jié)果還表明,拯救病毒的基因組具有穩(wěn)定的遺傳性。
利用新構(gòu)建出的感染性克隆,科研人員可以很方便地對RNA病毒的基因組進(jìn)行體外操作,從而對病毒的結(jié)構(gòu)、功能等多方面進(jìn)行研究。更長遠(yuǎn)地來說,CVA16感染性克隆為今后闡明病毒的致病性,開發(fā)針對EV71/CVA16的預(yù)防性疫苗和治療性藥物等提供了研究基礎(chǔ)。
該研究得到中國科學(xué)院“百人計劃”、生化工程國家重點(diǎn)實驗室開放基金及賽諾菲-安萬特-中科院上海生命科學(xué)研究院青年人才基金的資助。