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        1. 上海研謹(jǐn)生物科技有限公司

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          NF-KB p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

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          廠商性質(zhì)經(jīng)銷(xiāo)商

          所在地上海市

          更新時(shí)間:2020-03-17 15:50:17瀏覽次數(shù):2337次

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          應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)
          提供商: 上海研謹(jǐn)生物
          服務(wù)名稱(chēng): NF-KB p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
          規(guī)格: 實(shí)驗(yàn)服務(wù)
          價(jià)格: 200元
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          NF-KB p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

           

           

           

          核轉(zhuǎn)錄因子NF-kappaB (NF-kB) 是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子,參與調(diào)控多種與炎癥、抗凋亡、

          腫瘤形成和轉(zhuǎn)化有關(guān)的基因表達(dá)。NF- kappaB (NF _kB)初被鑒定為在B細(xì)胞中和免疫球蛋白k輕鏈的增強(qiáng)子結(jié)合。但隨后在非B-細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中被發(fā)現(xiàn),形成NF-KB和kB的復(fù)合物。初在DNA結(jié)合蛋白復(fù)臺(tái)物中分離的NF -kB是由p65(ReIA)和p50構(gòu)成的異源雙聚體。其他分離的單體包括p49 (也可稱(chēng)為p52) , p75 (C-Rel) ,p68(ReIB)。 p65,p68,p75單體起反式激活作用。p50, p49 (p52) 單體具有DNA結(jié)合活力,但只具有微量的反式激活作用。據(jù)報(bào)道p49和NF-kB的單體p65形成具有轉(zhuǎn)錄活力的異源雙體,類(lèi)似于p50/ p65異源雙體。p49/ p65和p50/ p65異源雙體在細(xì)胞質(zhì)中受一種叫kBa/MAD-3的抑制劑調(diào)節(jié)。

           

          IkB和p65單體結(jié)合,阻制了細(xì)胞核中的定位和DNA的結(jié)合。在體外高濃度的p65能形成同源雙聚體,能和DNA微弱地結(jié)合。Poly(dl:dC)能抑制這一 反應(yīng) 。p49和p50也能形 成同源雙聚體,但在細(xì)胞中的濃度很低。通常,在作NF-KB的凝膠遷移實(shí)驗(yàn)時(shí),在20ul的反應(yīng)體積中,有溶于10 mM HEPES的0.28pmoles的NF -kB9寡核苷酸(pH7.9), 50mMKCI, 0.2mMEDTA, 2.5mM DTT, 10%甘油,0.05%NP-40。當(dāng)用純化的蛋白時(shí),250-300ng足以形成凝膠遷移復(fù)合物, 而需用10ug的Hel a細(xì)胞核抽提物。凝膠遷移復(fù)合物在室溫中保溫30分鐘,在50mMTris(pH8 3)和38mM甘氨酸的7%聚丙烯酰胺凝膠電泳中分離凝膠遷移復(fù)合物。含考馬斯蘭和二甲苯藍(lán)色素的加樣溶液只能加入到陰性對(duì)照反應(yīng)中,因這兩種色素會(huì)加劇NF-kB復(fù)合物的解離。當(dāng)用Hel a細(xì)胞核抽提物作為結(jié)合蛋白來(lái)源時(shí),可形成兩種序列特異的凝膠遷移復(fù)合物,即p50/p50同源雙聚體和p50/ p65異源雙聚體。在表達(dá)p49,p50, p65的細(xì)胞中, 可檢測(cè)到4個(gè)序例特異的凝膠遷移復(fù)合物(p49/ p49,p50/ p50,p50/ p65,p49/ p65),如果存在高濃度的p65,可檢測(cè)到微量的p65/p65.

           

          下列試劑可加強(qiáng)NF- kB在體外的結(jié)合: mM的GTP, ATP, 精胺,亞精胺,鋇或鈣離子,ng的

          Co+3(NH3)6 (12) 。提取組織或細(xì)胞核蛋白,利用不同形式的NF -Kb p65抗體捕獲細(xì)胞核蛋白并加以區(qū)分,通過(guò)酶標(biāo)儀450nm處測(cè)定核蛋白標(biāo)準(zhǔn)品與NF -Kb p65吸光度值,進(jìn)行定量比較,從而明確目的蛋白的活化度。

           

           

          實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

          ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

          CCK8檢測(cè)

          基因組DNA提取

           

          蛋白相互作用分析

          Western Blot

           

          免疫組化

          熒光定量PCR

          動(dòng)物模型服務(wù)

          流式細(xì)胞檢測(cè)

          細(xì)胞增殖

          激光共聚焦

          DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

          細(xì)胞劃痕

          鈣離子濃度檢測(cè)

          掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

          microRNA 測(cè)序

          動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

          Taqman探針

          ATP/ADP檢測(cè)

           

          石蠟/冰凍切片

          定點(diǎn)突變

          線粒體膜電位(MMP)檢測(cè)

          細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

          藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

           

          免疫共沉淀

          真核表達(dá)載體構(gòu)建

          染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

          非標(biāo)定量(Label-free)實(shí)驗(yàn)

          酶活性檢測(cè)

          提供商: 上海研謹(jǐn)生物$r$n服務(wù)名稱(chēng):

          明膠酶譜MMP(2/9)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

          提供商: 上海研謹(jǐn)生物$r$n服務(wù)名稱(chēng):

          NF-KB p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

          提供商: 上海研謹(jǐn)生物$r$n服務(wù)名稱(chēng):

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