二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶試劑盒是植物光合作用中固定 CO2 的關(guān)鍵酶，同時參與植物 光呼吸代謝途徑，制約著碳素向 Calvin 循環(huán)和光呼吸循環(huán)分流，作為一種能夠催化羧化反應(yīng)和加氫 反應(yīng)的雙功能酶，其活性的大小對光合速率的研究具有重要意義。 Rubisco 可催化核酮糖-1,5-二磷酸（RuBP）和 CO2 結(jié)合生成 3-磷酸甘油酸（PGA），3-磷酸甘油 酸可進一步在 3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶的催化作用下生成甘油醛-3-磷酸，反應(yīng)過程 中伴隨著 NADH 氧化生成 NAD+，NADH 在 340 nm 處有特征吸收峰，通過測定 340 nm 處吸光度的 下降速率即可表征 Rubisco 活性。

二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶試劑盒注意事項為保證結(jié)果準(zhǔn)確且避免試劑損失，測定前請仔細(xì)閱讀說明書（以實際收到說明書內(nèi)容為準(zhǔn)），確 認(rèn)試劑儲存和準(zhǔn)備是否充分，操作步驟是否清楚，且務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本進行預(yù)測定， 過程中問題請您及時與工作人員聯(lián)系。

測定過程中所需要的儀器和試劑：紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、研缽 /勻漿器、臺式離心機、可調(diào)式移液器、恒溫水浴/培養(yǎng)箱和蒸餾水。

吸光值測定：①充分混勻并立即開始計時，測定 20 s（總時間）時 340 nm 處吸光值，記為 A1 測 定和 A1 空白；②25℃恒溫準(zhǔn)確反應(yīng) 300 s，測定 320 s（總時間）時 340 nm 處吸光值，記為 A2 測定 和 A2 空白；③計算 ΔA 測定=A1 測定-A2 測定，ΔA 空白=A1 空白-A2 空白，ΔA=ΔA 測定-ΔA 空白。 注：空白組只需測定 1-2 次。