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        1. 北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司

          中級(jí)會(huì)員·11年

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          WB-0072-RIPA  組織 / 細(xì)胞裂解液(強(qiáng))
          WB-0072-RIPA 組織 / 細(xì)胞裂解液(強(qiáng))

          地:北京

          貨物所在地:北京北京市

          更新時(shí)間:2024/11/27 8:46:38

          訪問次數(shù):757

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          中級(jí)會(huì)員·11年
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          譚柳
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          86-010-89756821
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          供應(yīng)簡(jiǎn)介
          RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等。
          注意事項(xiàng) : 1.為獲得Z佳的實(shí)驗(yàn)效果,可適當(dāng)分裝使用,以盡量避免反復(fù)凍融。 2.PMSF應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)加。 3.裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。 4.蛋白酶抑制劑均有較高的毒性,為


          詳細(xì)介紹

          RIPA 組織 / 細(xì)胞裂解液 規(guī)格;50ml 編號(hào);WB-0072  

          產(chǎn)品簡(jiǎn)介:RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。
          RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等。
          RIPA裂解液(強(qiáng))的主要成分為50mM Tris(pH7.4),150mM NaCl,1%Triton X-100,
          1% sodium deoxycholate,0.1%SDS,以及sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,
          leupeptin等多種抑制劑??梢杂行б种频鞍捉到狻?br />用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品,可以用本公司生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。
          由于含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
          包裝清單:

          RIPA裂解液(強(qiáng))50ml(-20℃保存)
          PMSF(100×)550ul(-20℃保存)
          使用說明書1份

          使用說明:

          取出裂解液,待融化后顛倒混勻數(shù)次,適量分裝凍存。
          在使用前取出PMSF(100mM),按比例加入(使其zui終濃度為1mM)混勻,立即使用。
          1、培養(yǎng)細(xì)胞:
          (1)貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗2-3遍
          (如血清中的蛋白沒有干擾,也可以不洗)。
          按6孔板每孔加入100-200ul的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。
          通常裂解液接觸細(xì)胞數(shù)秒后細(xì)胞就會(huì)被裂解。
          (2)懸浮細(xì)胞:收集培養(yǎng)細(xì)胞,離心去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗2-3遍
          (如血清中的蛋白沒有干擾,也可以不洗),
          用手指把細(xì)胞用力彈散,按6孔板每孔細(xì)胞加入100-200ul的比例加入裂解液。
          如果細(xì)胞數(shù)量較大,應(yīng)按50-100萬(wàn)細(xì)胞/管分裝或根據(jù)細(xì)胞數(shù)量按比例增加裂解液。
          用手指輕彈管底以促進(jìn)裂解液和細(xì)胞充分接觸,裂解*時(shí)應(yīng)無(wú)明顯的細(xì)胞顆粒。
          裂解物經(jīng)10,000-14,000g離心3-5min,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、
          免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
          裂解液用量說明:通常6孔板每孔細(xì)胞加入100微升裂解液已經(jīng)足夠,
          但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到150微升或200微升。
          2、組織樣品
          取Ep管,分別稱重標(biāo)記,把組織剪切成小塊裝入Ep管中,稱重。
          按每20mg組織加100-200ul的比例加入裂解液(如裂解不*,
          可以適當(dāng)增加用量;如需要的蛋白樣品濃度較高,可以適當(dāng)減少用量)。
          用手握式電動(dòng)組織細(xì)胞勻漿器勻漿約1min或直至充分裂解。
          10,000-14,000g離心3-5min,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
          如果組織樣品本身非常細(xì)小,如淋巴細(xì)胞,可直接加入裂解液,通過振蕩(Vortex)以使樣品裂解*。
          保存條件:
          PMSF需-20℃保存,裂解液若經(jīng)常使用,可于4℃保存至少三個(gè)月。若長(zhǎng)期保存,建議置于-20℃,可保存一年。
          裂解液中含有少量SDS,溫度低會(huì)有沉淀析出,屬于正?,F(xiàn)象,使用時(shí)37℃加熱溶解即可。
          注意事項(xiàng):
          1、為獲得*的實(shí)驗(yàn)效果,可適當(dāng)分裝使用,以盡量避免反復(fù)凍融。
          2、PMSF應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)加。
          3、裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。
          4、蛋白酶抑制劑均有較高的毒性,為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
          一旦直接接觸,請(qǐng)立即用流水沖洗,再向醫(yī)療保健結(jié)構(gòu)咨詢。
          常見問題分析:
          細(xì)胞加入RIPA裂解液冰浴裂解后,離心,發(fā)現(xiàn)在液面附近有絮狀物產(chǎn)生,是什么原因?
          答:一般是因?yàn)榧?xì)胞裂解不*造成的。
          改善方法:
          (1)加大裂解液的量和裂解時(shí)間。
          (2)加入裂解液后冰浴稍微超聲處理,使其裂解*。
          一般來說,如果細(xì)胞裂解后變得澄清、不粘稠,這個(gè)時(shí)候再離心,就不會(huì)出現(xiàn)絮狀物了。

                              

            


                              

            

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