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當前位置：> 供求商機> WB-0071-RIPA 組織 / 細胞裂解液（中）
所在地：北京
貨物所在地：北京北京市
更新時間：2024/11/27 8:46:38
訪問次數(shù)：481
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| 品名 | 編號 | 規(guī)格 | 價格 | |
| RIPA裂解液 | WB-0071 | 50ml | 80 |
使用說明 ：
1．培養(yǎng)細胞
取出裂解液，待融化后顛倒混勻數(shù)次，適量分裝凍存。在使用前取出PMSF(100mM)，按比例加入（使其zui終濃度為1mM）混勻，立即使用。
貼壁細胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗2-3遍(如血清中的蛋白沒有干擾，也可以不洗)。按6孔板每孔加入100-200微升的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞數(shù)秒后細胞就會被裂解。
懸浮細胞：收集培養(yǎng)細胞，離心去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗2-3遍(如血清中的蛋白沒有干擾，也可以不洗)，用手指把細胞用力彈散，按6孔板每孔細胞加入100-200微升的比例加入裂解液。如果細胞數(shù)量較大，應(yīng)按50-100萬細胞/管分裝或根據(jù)細胞數(shù)量按比例增加裂解液。用手指輕彈管底以促進裂解液和細胞充分接觸，裂解*時應(yīng)無明顯的細胞顆粒。
裂解物經(jīng)10,000-14,000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入100微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到150微升或200微升。
2．組織樣品
取Ep管，分別稱重標記，把組織剪切成小塊裝入Ep管中，稱重。按每20毫克組織加100-200微升的比例加入裂解液(如裂解不*，可以適當增加用量；如需要的蛋白樣品濃度較高，可以適當減少用量)。用手握式電動組織細胞勻漿器勻漿約1分鐘或直至充分裂解。10,000-14,000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
如果組織樣品本身非常細小，如淋巴細胞，可直接加入裂解液，通過振蕩（Vortex）以使樣品裂解*。
保存條件：
PMSF需－20℃保存，裂解液若經(jīng)常使用，可于4℃保存至少三個月。若長期保存，建議置于－20℃。
注意事項 ：
1．為獲得*的實驗效果，可適當分裝使用，以盡量避免反復(fù)凍融。
2．PMSF應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)加。
3．裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進行。
4．蛋白酶抑制劑均有較高的毒性，為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。一旦直接接觸，請立即用流水沖洗，再向醫(yī)療保健結(jié)構(gòu)咨詢。
包裝清單：
| RIPA裂解液 | 50ml（－20℃保存） |
| PMSF（100X） | 550ul（－20℃保存） |
| 使用說明書 | 1份 |
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