流式細胞術(shù)檢測技術(shù)服務(wù)

 流式細胞術(shù)檢測技術(shù)服務(wù)
1、檢測項目：
   （1）細胞周期細胞   （2）細胞凋亡    （3）免疫細胞分型     （4）表面抗原鑒定          （5）細胞內(nèi)鈣離子檢測   （6）線粒體功能      （7）細胞分選
2、樣本及來源：
    1） 單個細胞：1~2×106 個細胞左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
    2） 外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
 
說明：
1、  實驗所用的流式細胞儀為COULTER EPICS XL。
2、  送檢樣本量：
        1）、單個細胞：1~2×106 個細胞左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
        2）、外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
3、  用戶需要進行流式細胞儀檢測時須提前預(yù)約，同時說明實驗?zāi)康?、方法等。一次送檢標(biāo)本數(shù)不少于10個。如果一次送檢標(biāo)本總數(shù)不足10個，每個測試費用為標(biāo)準收費×2。
4、  我公司在正式接受實驗委托一周內(nèi)交付實驗結(jié)果。所提供實驗結(jié)果忠實于樣本的實際情況。
5、  用戶須一次性全額預(yù)付實驗費。
6、  部分常用熒光探針，如PI等，我公司可免費提供，；特殊標(biāo)記物，如CD抗體等，用戶須另行購買，也可委托我公司代購；用戶所提供抗體應(yīng)可與樣本發(fā)生特異性識別反應(yīng)。
7、  由用戶提供的樣品或試劑所致的實驗問題由用戶負責(zé)。
8、  請在表中說明檢測具體要求（可另附頁），由于填寫資料不詳所致任何問題由用戶負責(zé)。
9、  請在送樣的同時提供樣本來源及處理方法等信息，樣品檢測后原則上本公司不負責(zé)保存。
客戶提供：
（1）標(biāo)本:組織、細胞、全血（抗凝）
（2）抗體（熒光素標(biāo)記）
        PEqiang，適用于弱表達抗原
        FITC*便yi，適用于強表達抗原，適用范圍廣
        biotin-avidin不適合 弱抗原的檢測
（3）其他試劑（如Fluo-3）
（4）染色試劑盒
 附：流式細胞術(shù)檢測樣品推薦制備方法：
 
A. 直接標(biāo)記抗體（FITC標(biāo)記抗體）：
    （1） 、收集1×106個細胞，800rpm離心5min，4℃以上冷PBS洗一次。
    （2） 、用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘，800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞，800rpm離心5min。
    （3） 、用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞，冰上孵育10min，800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體（5×105個細胞/20ul抗體）的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定，待測即可。
    （4） 、用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
 
B. 未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法：
    （1）、收集2×106個細胞，用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次，800rpm離心5min。
    （2）、用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min；2ml PBS重懸細胞，800rpm離心5min；
    （3）、用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞，冰上放置10min,800rpm離心5min。
    （4）、加入飽和劑量未標(biāo)記抗體，冰上放置40min,800rpm離心5min，用2ml冷的PBS 重懸細胞，800rpm離心5min，洗去未結(jié)合一抗，重復(fù)一次。
    （5）、加入熒光標(biāo)記（FITC）標(biāo)記的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm離心5min，去上清，PBS洗滌兩次。
    （6）、加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞；固定待測。
    （7）、流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
 
C.細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品（PI染色）的制備：
    （1）、待測樣本制成單細胞懸液，然后2000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，棄上清。
    （2）、用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小時。
    （3）、調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升，取1毫升細胞懸液，用PBS洗三次，細胞重懸于1毫升PI染液中，37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
    （4）、PI染液終濃度為50微克/毫升，RNase A終濃度為20微克/毫升。

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