大鼠脂多糖結合蛋白(LBP)ELISA試劑盒? 的在ELISA實驗前的注意事項
1 仔細閱讀說明書
2 確定試劑盒在有效期內
3 按說明書確定所有試劑齊全(數量、體積)
4 標本制備要規(guī)范,每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份。短期內無法實驗者,注意低溫保存
5 準備好所有實驗額外所需物品,如試管、吸頭、移液器、離心機等
6 根據檢測標本數量確定所需試劑的量
7 按說明書將所用試劑平衡至室溫,配制所需試劑
DIY夾心法ELISA常見技術指南:
1、選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對;若選擇兩個單抗,必須識別不同表位的抗體;從同一家公司選擇抗體對。
2、ELISA實驗中為了確定*信號和zui低背景應將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預實驗中進行彼此相抗的滴定。同時,應包括在適當范圍內的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進行操作。
3、標準品的配制:對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書,注意每批的細節(jié)。在使用細胞因子前,瞬時離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細胞因子。根據每批說明書中的細節(jié),將凍干的細胞因子復溶。
4、一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml??衫脴藴实腅LISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內提高靈敏度。
5、為了優(yōu)化靈敏度,建議一夜后孵育標準品和標本。
大鼠脂多糖結合蛋白(LBP)ELISA試劑盒保存:
未開封的試劑盒應儲存于2-8℃;開封后的酶標板應與干燥劑一起儲存于鋁箔袋中置于2-8℃保存。僅在此出儲存條件下,產品在有效期內可正常使用。
濃洗滌液低溫保存會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
中、英文說明書可能會有不*之處,請以英文說明書為準。
剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質,此為正?,F象,不會對實驗結果造成任何影響。
需準備材料:
1.96孔不透明微孔板
2.碳酸鹽/碳酸氫鈉緩沖液中捕捉抗體,ph9.4,5-10μg/ml
3.洗滌緩沖液TBS(0.25M Tris,0.15M Nacl)或PBS(0.1M 磷酸鹽,0.15M Nacl;pH7.2)
4.封閉緩沖液包含0.05% Tween-20
5.一抗?jié)舛?.05-0.1μg/ml
6.HRP-偶合物濃度10-20ng/ml
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