BCA蛋白濃度測定試劑盒 NobleRyder P0030

北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)BCA蛋白濃度測定試劑盒 NobleRyder P0030量大優(yōu)惠，咨詢 ：

BCA蛋白濃度測定試劑盒使用說明

試劑盒組成 包裝（500微孔） 保存
 
BCA試劑 100ml 2-8℃
Cu試劑 3ml 2-8℃
PBS稀釋液 30ml 2-8℃
BSA蛋白標準 （5mg/ml BSA） 1ml  -20℃
 
 本試劑盒自訂購之日起一年內(nèi)有效。本試劑盒用于酶標板或者200ul比色皿時可做500孔。當使用2ml比色皿時可做50孔，如果是1ml比色皿時可做100孔。

產(chǎn)品簡介

堿性條件下，蛋白將Cu2+還原為Cu+， Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物，測定其在562nm處的吸收值，并與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。常用濃度的去垢劑SDS，Triton X-100，Tween不影響檢測結(jié)果，但受螯合劑（EDTA，EGTA）、還原劑（DTT，巰基乙醇）和脂類的影響。實驗中，若發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高，可試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

使用說明

一，微孔酶標儀法

1.         配制工作液: 根據(jù)標準品和樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑（50:1）配制成BCA工作液，充分混勻（混合時可能會有渾濁，但混勻后就會消失）。BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.         稀釋標準品：取10微升BSA標準品用PBS稀釋至100微升（樣品一般可用PBS稀釋），使終濃度為0.5mg/ml。將標準品按0, 2, 4，6，8, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白標準品孔中，加PBS補足到20微升。

3.         將樣品作適當稀釋（多做幾個梯度，如作2倍、4倍、8倍稀釋），加20微升到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時的誤差，標準線前面的點可能不很準確，所以盡可能的讓樣品點落在標準線1/2后。

4.         各孔加入200微升BCA工作液，37℃放置15-30分鐘。用酶標儀測定A562nm，根據(jù)標準曲線計算出蛋白濃度。使用溫箱孵育時，應(yīng)注意防止因水分蒸發(fā)影響檢測結(jié)果。

二，分光光度計法、

如沒有酶標儀，可用分光光度計在離心管中混勻后加入比色皿中比色。

步驟如下：

1．配制工作液: 根據(jù)標準品和樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑（50:1）配制成BCA工作液，充分混勻（混合時可能會有渾濁，但混勻后就會消失）。BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。

2，  稀釋標準品：取100微升BSA標準品用PBS稀釋至1ml（樣品一般可用PBS稀釋），使終濃度為0.5mg/ml。

3，  取八支（或者更多）5ml離心管，標讓號，按下表加入試劑。

離心管號 1 2 3 4 5 6 7（樣品管1） 8（樣品管2） 9（樣品管3）
標準蛋白BSA 0 40ul 80ul 120ul 160ul 200ul 200ul適當稀釋的樣品1 200ul適當稀釋的樣品2 ……
PBS 200ul 160ul 120ul 80ul 40ul 0 0 0 0
BCA工作液 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml
4，  37℃放置15-30分鐘。用分光光度計測562nm處吸光值，根據(jù)標準曲線計算出蛋白濃度。

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