黄色视频不卡_午夜福利免费观看在线_亚洲国产精品999在线_欧美绝顶高潮抽搐喷水_久久精品成人免费网站_晚上一个人看的免费电影_国产又色又爽无遮挡免费看_成人国产av品久久久

    1. <dd id="lgp98"></dd>
      • <dd id="lgp98"></dd>
        1. 上海北諾生物科技有限公司

          中級(jí)會(huì)員·14年

          聯(lián)系電話

          15800960770

          您現(xiàn)在的位置: 首頁> 技術(shù)文章 > RNA實(shí)驗(yàn)技術(shù):核糖核酸酶保護(hù)分析
          中級(jí)會(huì)員·14年
          聯(lián)人:
          周經(jīng)理 劉經(jīng)理
          話:
          021-57730393
          機(jī):
          15800960770
          真:
          86-021-61496710
          址:
          上海市徐匯區(qū)宜山路520號(hào)中華門大廈18樓D座
          個(gè)化:
          www.bnbiotech.com
          網(wǎng)址:
          www.bnbiotech.com

          掃一掃訪問手機(jī)商鋪

          RNA實(shí)驗(yàn)技術(shù):核糖核酸酶保護(hù)分析

          2013-10-22  閱讀(1140)

          分享:
          一、體外轉(zhuǎn)錄
          在無菌1.5 ml 微型離心管中,結(jié)合以下內(nèi)容:
          4 ul 5倍轉(zhuǎn)錄緩沖液
          2 ul 0.1 M DTT
          4 ul 2.5 MM NTP(A,C,G)
          0.8 ul RNA酶抑制劑(25 U/ul)RNA酶抑制劑(Promega)中
          100 UM冷UTP
          1 ul/ug  UL線性DNA模板
          5 ul 10 UCI / UL P32 UTP(800Ci/mmol)
          1 ul RNA聚合酶SP6,T7或T3
          總體積?20 ul。
          孵育1小時(shí),37℃。
          2 ul 每個(gè)轉(zhuǎn)錄的DNA酶I,孵育20分鐘, 37℃。
           
          二、探頭凈化
          凈化探頭使用QIAGEN公司的QIAquick核苷酸去除試劑盒或Boehringer離心柱(G50葡聚糖凝膠)。檢查1 ul 在閃爍計(jì)數(shù)器,P32通道。一個(gè)很好的探頭將5×105~1×106 CPM。
           
          三、雜交
          打開heatblock到95C。對(duì)于在水或乙醇中的樣品,干燥適當(dāng)?shù)腞NA量,并包括一個(gè)管與1 ul tRNA或糖原(Sigma公司),這是作為陰性對(duì)照。
           
          每個(gè)樣品應(yīng)具有以下:
          24 ul 甲酰胺
          2 ul 0.6 M管
          2.4 ul 5 M氯化鈉
          0.3 ul 0.1 M EDTA
          2×105 cpm探針
          5×104 cpm加載控制探針
          DEPC水
          總體積30ul
          以及混合樣品。加熱95℃,10分鐘。孵育4小時(shí), 55°C。

          四、RNase消化
          核糖核酸酶消化緩沖液:
          300 MM 醋酸鈉
          10 mM 的TRIS
          5 mM EDTA
          每個(gè)樣品添加350 ul 消化緩沖液。
          1 ul 4 mg/ml 核糖核酸酶A和0.4 ul 10 u/ul 核糖核酸酶T1。
          孵育,30℃,45分鐘至1小時(shí)。
           
          五、蛋白酶K
          向每個(gè)樣品中添加20%SDS和2.5 ul 的10 mg/ml 的蛋白酶K孵育,37℃ 10 μl 的15-20分鐘。

          六:清理
          提取一次400 ul 酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)
          將上清轉(zhuǎn)移到新的試管中。加入1000 ul 的100%乙醇和1 μl 為10 mg/ml 的糖原。拌勻。
          在-70℃,30分鐘或在干冰/ ETOH浴中10分鐘孵育樣品。
          旋轉(zhuǎn)的離心15分鐘。吸EtOH。讓小球在空氣中晾干。
          重懸在8 ul 甲酰胺的裝載染料。允許坐在RT 5-10分鐘,經(jīng)常攪拌。
           
          七:聚丙烯酰胺凝膠電泳分析
          熱樣品5分鐘,100℃。加載到5%polyacrylamide/7 M尿素變性凝膠2000 cpm 的分子量標(biāo)記物。運(yùn)行凝膠38-42mA。干凝膠,暴露于膜O / N在-70C增感屏。

          會(huì)員登錄

          ×

          請(qǐng)輸入賬號(hào)

          請(qǐng)輸入密碼

          =

          請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

          收藏該商鋪

          X
          該信息已收藏!
          標(biāo)簽:
          保存成功

          (空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

          常用:

          提示

          X
          您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
          產(chǎn)品對(duì)比 二維碼 在線交流

          掃一掃訪問手機(jī)商鋪

          對(duì)比框

          在線留言
          仁布县| 洪雅县| 如皋市| 昭平县| 平遥县| 连山| 辉南县| 合阳县| 新巴尔虎左旗| 叙永县| 通州区| 江北区| 广东省| 大竹县| 南部县| 会宁县| 湘西| 紫阳县| 库尔勒市| 都匀市| 大庆市| 叶城县| 凤城市| 兴宁市| 印江| 武威市| 辛集市| 文化| 麦盖提县| 松溪县| 常州市| 宝坻区| 白沙| 奉贤区| 清徐县| 苍山县| 清镇市| 洱源县| 尼勒克县| 伊吾县| 大城县|