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高分辨率熔解（HRM）是一種基于雙鏈DNA在升溫時(shí)的解鏈行為的差異來區(qū)分不同的PCR產(chǎn)物的新技術(shù)。HRM技術(shù)的高分辨率使其得以區(qū)分即使是單個(gè)堿基的差異，因此該技術(shù)得以廣泛應(yīng)用于SNP分型、突變掃描、種屬鑒定和DNA甲基化分析，是目前經(jīng)濟(jì)和快速的基因分型和突變篩查方法之一。該有聲視頻攝錄于2010年維也納qPCR論壇。主講人：AndreasMissel,Ph.D.AssociateDirector,R&D,QIAGENAndreasMissel博士在QIAGEN負(fù)責(zé)修飾與擴(kuò)增技術(shù)與產(chǎn)品的開發(fā)，如用
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一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)和掌握外源基因?qū)胝婧思?xì)胞的主要方法——脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染。了解外源基因進(jìn)入的一般性方法，觀測(cè)外源蛋白的表達(dá)（綠色熒光蛋白），為染色準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料。二、實(shí)驗(yàn)原理上圖所示是脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染的示意圖，它顯示了外源質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞的一般過程。外源基因進(jìn)入細(xì)胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導(dǎo)法和病毒介導(dǎo)法。電擊法是在細(xì)胞上短時(shí)間暫時(shí)性的穿孔讓外源質(zhì)粒進(jìn)入；磷酸鈣法和脂質(zhì)體法是利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進(jìn)入細(xì)胞；病毒法是利用包裝了外源基因的病毒感染
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大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備、重組DNA的轉(zhuǎn)化、克隆篩選
1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵笸ㄟ^本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)氯化鈣法制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞和外源質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)入受體菌細(xì)胞的技術(shù)以及篩選轉(zhuǎn)化體的技術(shù)。了解細(xì)胞轉(zhuǎn)化的概念及其在分子生物學(xué)研究中的意義。2.相關(guān)知識(shí)及原理感受態(tài)細(xì)胞（Competentcells）：受體細(xì)胞經(jīng)過一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl等化學(xué)試劑法）的處理后，細(xì)胞膜的通透性發(fā)生變化，成為能容許多有外源DNA的載體分子通過的感受態(tài)細(xì)胞（competentcell）。轉(zhuǎn)化（transformation）：是將異源DNA分子引入一細(xì)胞株系，使受體細(xì)胞獲得新的 -
1.RNA提取的樣品很重要，包括樣品的質(zhì)量，細(xì)胞數(shù)，雜質(zhì)含量等等，建議：按照說明書的要求，每毫升TRIzol不超過100mg再低些在50mg左右;樣品的質(zhì)量一定要控制好；研磨得時(shí)間不宜過長，成粉狀即可，液氮常加（研磨的意義主要是使細(xì)胞與TRIzol的作用更充分，如有團(tuán)塊挑出取質(zhì)舍量）；作用時(shí)間15分鐘；2.氯仿抽提，一定要混勻，劇烈些沒關(guān)系。但一定要充分作用；3.異丙醇沉淀，混勻，冰上操作會(huì)在一定程度上增加RNA產(chǎn)量；4.75%乙醇清洗一次即可，速度我一般選擇高速8000g-10000g之間的，
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具體的提取步驟如下:1.樣品加氯仿分層后,移去上層水相（該水相里就是RNA，可照常繼續(xù)進(jìn)行RNA的提?。?加0.3ml乙醇沉淀中間層和有機(jī)相中的DNA，渦旋混合，室溫放置3分鐘，2-8℃不超過2000×g離心5分鐘?！咀ⅲ哼@一步同時(shí)可以除去未*消化的殘?jiān)?.小心吸出沉淀后的上清，加1.5ml異丙醇沉淀蛋白質(zhì)。室溫放置10分鐘，2-8℃12000×g離心10分鐘棄上清。3.加2ml含0.3M鹽酸胍的95%乙醇洗滌蛋白質(zhì)沉淀。室溫放置20分鐘，2-8℃7500×g離心5分鐘，棄上清，重復(fù)兩次?！咀?/div>找質(zhì)粒,載體圖譜及序列的方法1.Vectorpedia：輸入質(zhì)粒骨架，直接查詢，非常方便;http://www.addgene.org/pgvec1?f=v&cmd=listvecinfo2.google檢索式子：質(zhì)粒名＋map質(zhì)粒名＋sequence＋filetype:txtorfiletype:pdf或者：進(jìn)入google，點(diǎn)擊"圖片搜索"，直接查找圖譜.3.googlescholar:http://scholar.google.com/有些質(zhì)粒是經(jīng)過改造的，所以通過上述方法不能查詢到相應(yīng)信
原裝西班牙瓊脂糖Biowest aga技術(shù)參數(shù)
瓊脂（Agar），又名瓊膠、菜燕、凍粉，是一類從石花菜及其它紅藻類（Rhodophyceae）植物提取出來的藻膠（phycocottoid），在我國及日本已有三百多年（1658年）的歷史。瓊脂糖Agarose，縮寫為AG，是瓊脂中不帶電荷的中性組成成份，也譯為瓊膠素或瓊膠糖。瓊膠糖化學(xué)結(jié)構(gòu)由β-D-吡喃半乳糖（1-4）連接3,6-脫水α-L-吡喃半乳糖基單位構(gòu)成.用途:瓊脂、瓊脂糖因?yàn)橛刑厥獾哪z凝性質(zhì)，尤其有顯著的穩(wěn)固性、滯度和滯后性，并且易吸收水分，有特殊的穩(wěn)定效應(yīng)；已經(jīng)廣泛使用于食用、醫(yī)藥、英國OXOID 酵母粉LP0021技術(shù)參數(shù)
英國Oxoid-LP0021酵母粉|YeastExtract-英國Oxoid-LP0021500g酵母粉|YeastExtract干酵母的自溶產(chǎn)物,富含氨基氮和維生素,優(yōu)其是水溶性維生素B復(fù)合物的含量豐富.它是許多培養(yǎng)基的組份之一,也常用于發(fā)酵肉湯以促進(jìn)細(xì)菌的生長.當(dāng)需要細(xì)菌快速,大量繁殖時(shí),也推薦使用.成份分析（每批平均）:（%W/W）總氮:10.9氨氮:5.3氯化鈉:0.3pH（2%溶液）:7.0英國Oxoid-LP0021酵母粉YeastExtract英國Oxoid-LP0021酵母粉Ye
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