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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·12年
60723ESL-Histidine HCl L-組-氨酸鹽酸鹽
| 參考價(jià) | ￥1095 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 60723ES 型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
規(guī)格
| 100 T | 1095元 | 99 件 可售 |
訪問(wèn)次數(shù)：608更新時(shí)間：2024-02-18 16:41:35
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 兩周 | 貨號(hào) | 60723ES25 |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
總膽//固//醇（Total Cholesterol，TC）是指所有脂蛋白所含膽//固//醇的總和，包括游離膽//固//醇（Free Cholesterol，F(xiàn)C）和膽//固//醇酯（Cholesteryl Ester，CE）。本試劑盒的檢測(cè)方法是微量法，既可以用可見(jiàn)分光光度計(jì)檢測(cè)，也可以用酶標(biāo)儀檢測(cè)。該產(chǎn)品的檢出限是0.143 μmol/mL，線性范圍為0.156-5 μmol/mL。
作用原理是通過(guò)酯酶催化膽//固//醇酯水解生成游離膽//固//醇（FC）和游離脂//肪酸（FFA），從而把膽//固//醇酯轉(zhuǎn)化為FC；進(jìn)一步利用膽//固//醇氧化酶催化FC氧化，生成4-膽甾烯酮和H2O2；最后利用過(guò)氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安//替//比//林和酚，生成紅色醌類化合物，其在500 nm有特征吸收峰，顏色深淺與TC含量成正比。作用方式如下：
測(cè)定總膽//固//醇(TC)請(qǐng)選擇60723ES 總膽//固//醇(TC)含量檢測(cè)試劑盒；測(cè)定游離膽//固//醇(FC)請(qǐng)選擇60724ES 游離膽//固//醇(FC)含量檢測(cè)試劑盒。
產(chǎn)品信息
貨號(hào) | 60723ES60 |
規(guī)格 | 100 T |
組分信息
組分編號(hào) | 組分名稱 | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存條件 |
60723-A | 試劑一 | 30 mL | 2~8℃ |
60723-B | 試劑二 | 160 μL | 2~8℃ |
60723-C | 試劑三 | 25 μL | 2~8℃ |
60723-D | 標(biāo)準(zhǔn)品 | 10 mg | 2~8℃ |
儲(chǔ)存條件
2~8℃保存，有效期6個(gè)月。
使用說(shuō)明
【注意事項(xiàng)】實(shí)驗(yàn)之前建議選擇3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)，建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和溶劑：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、天平、低溫臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、可調(diào)式移液槍、EP管、蒸餾水和異丙醇。
溶液的配制：
1）自備提取液異丙醇：大約需要110 mL，常溫保存；試劑盒內(nèi)提供一個(gè)30 mL棕色空瓶，僅做分裝使用。
2）標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配置：10 mg膽//固//醇使用前加入517 μL提取液，振蕩溶解后即為50 μmol/mL的膽//固//醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，2~8℃可保存4周。
3）試劑三液體置于試劑瓶?jī)?nèi)EP管中。
4）工作液的配制：根據(jù)樣本量將試劑一、試劑二、試劑三按照3 mL、20 μL、3 μL的比例配制工作液，約為16 T，現(xiàn)用現(xiàn)配。
3. 操作步驟
1）樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
a. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為 1：5~10 的比例（建議稱取約0.1 g組織，加入1 mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。10000 g，4℃離心10 min，取上清置冰上待測(cè)。
b. 細(xì)菌/細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1 mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300 w，超聲2秒，間隔3秒，總時(shí)間3 min）；然后10000 g，4℃離心10 min， 取上清置于冰上待測(cè)。
c. 血清（漿）等液體樣本：直接測(cè)定，若有沉淀請(qǐng)離心后取上清待測(cè)。
2）測(cè)定步驟
a. 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至500 nm，分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。
b. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋：將50 μmol/mL膽//固//醇標(biāo)準(zhǔn)溶液用提取液進(jìn)行稀釋，得到2.5、2、1.25、0.625、0.3125、0.15625 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
c. 標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋可參考下表：
序號(hào) | 稀釋前濃度（μmol/mL） | 標(biāo)準(zhǔn)溶液體積（µL） | 提取液體積（µL） | 稀釋后濃度（μmol/mL） |
1 | 50 | 50 | 950 | 2.5 |
2 | 2.5 | 800 | 200 | 2.0 |
3 | 2 | 625 | 375 | 1.25 |
4 | 1.25 | 500 | 500 | 0.625 |
5 | 0.625 | 500 | 500 | 0.3125 |
6 | 0.3125 | 500 | 500 | 0.15625 |
注：實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需20 µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。
d. 在1.5 mLEP管/96孔板按下表步驟加樣
試劑名稱（µL） | 測(cè)定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
樣本 | 20 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)溶液 | - | 20 | - |
提取液 | - | - | 20 |
工作液 | 180 | 180 | 180 |
充分混勻，37℃靜置15 min，反應(yīng)完成后測(cè)定500 nm處吸光值A(chǔ)，分別記為A測(cè)定、A標(biāo)準(zhǔn)和A空白，ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。空白管和標(biāo)準(zhǔn)曲線只需測(cè)1-2次。注：若樣本為血清，則空白管中的提取液（異丙醇）需要更換為蒸餾水進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 | |||
3) 總膽//固//醇含量計(jì)算
a. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)（y，ΔA標(biāo)準(zhǔn)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA測(cè)定（y，ΔA測(cè)定）帶入公式計(jì)算樣本濃度（x，μmol/mL）。
b. 總膽//固//醇含量的計(jì)算：
（1）按血清（漿）等液體體積計(jì)算：TC含量（μmol/dL）=x×100
（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算：TC含量（μmol/mg prot）=x×V提取÷（Cpr×V提?。?x÷Cpr
（3）按樣本質(zhì)量計(jì)算：TC含量（μmol/g 質(zhì)量）=x×V提取÷W=x÷W
（4）按細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量計(jì)算：TC含量(μmol/104 cell)=x×V提取÷500=0.002x
100：?jiǎn)挝粨Q算系數(shù)，1 dL=100 mL；V提?。杭尤霕颖镜奶崛∫后w積，1 mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)。
4. 實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
取鼠血清樣本，直接按照測(cè)定步驟操作，使用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.092-0.048=0.044，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.4331x-0.0623，計(jì)算 x=0.2454，按血清（漿）等液體體積計(jì)算：TC 含量（μmol/dL）=x×100=0.2454×100=24.54 μmol/dL。
注意事項(xiàng)
如果測(cè)定吸光值超過(guò)線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者用提取液稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定，但注意同步修改計(jì)算公式。
提取液中含有使蛋白變形的成分，故按蛋白濃度計(jì)算時(shí)需要重新提取蛋白進(jìn)行測(cè)定。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
本產(chǎn)品僅作科研用途！
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