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          細(xì)胞培養(yǎng)基類型及其特性

          閱讀:2945          發(fā)布時(shí)間:2013-11-21

              培養(yǎng)基是既是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是培養(yǎng)細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。培養(yǎng)基的種類很多,按其物質(zhì)狀態(tài)分為半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基兩類;按其來源分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基。 

          (1)合成培養(yǎng)基:合成培養(yǎng)基是根據(jù)細(xì)胞所需物質(zhì)的種類和數(shù)量嚴(yán)格配制而成的。內(nèi)含碳水化合物、氨基酸、脂類、無機(jī)鹽、維生素、微量無素和細(xì)胞生長因子等。單獨(dú)使用細(xì)胞雖有生存但不能很好的生長增殖。


          (2)天然培養(yǎng)基:使用zui普遍的天然培養(yǎng)基是血清,基本以小牛血清zui普遍。血清由于含有多種細(xì)胞生長因子、促貼附因子及其多活性物質(zhì)。與合志培養(yǎng)基合用,能使細(xì)胞碩利增殖生長。常見使用zui為5-20%。

          下面介紹一些常用培養(yǎng)基以及特性

          1、RPMI-1640 Medium

              RPMI-1640廣泛應(yīng)用于哺乳動(dòng)物、特殊造血細(xì)胞、正?;驉盒栽錾陌准?xì)胞,雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng),是目前應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基。主要用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞以及HCT-15上皮細(xì)胞等均可參考使用。

          2、Minimum Essential Medium(MEM)

              也稱zui低必需培養(yǎng)基,它僅含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素。成分簡(jiǎn)單,可廣泛適應(yīng)各種已建成細(xì)胞系和不同地方的哺乳動(dòng)物細(xì)胞類型的培養(yǎng)。MEM-Alpha一般用于培養(yǎng)一些難培養(yǎng)細(xì)胞類型,而其它沒有特殊之處的細(xì)胞株則幾乎均可采用MEM來培養(yǎng)。

          3、DMEM-高糖(標(biāo)準(zhǔn)型)
              是一種應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基,可用于許多哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),更適合高密度懸浮細(xì)胞培養(yǎng)。適用于附著性較差,但又不希望它脫離原來生長點(diǎn)的克隆培養(yǎng),也可用于雜交瘤中骨髓瘤細(xì)胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng)。

          4、DMEM-低糖(標(biāo)準(zhǔn)型)
              是一種應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基,可用于許多哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。低糖適于依賴性貼壁細(xì)胞培養(yǎng),特別適用于生長速度快、附著性較差的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)。

          5、DMEM/F12

              DMEM/F12培養(yǎng)基適于克隆密度的培養(yǎng)。F12培養(yǎng)基成分復(fù)雜,含有多種微量元素,和DMEM以1:1結(jié)合,稱為DMEM/F12培養(yǎng)基(DME/F12medium),作為開發(fā)無血清配方的基礎(chǔ),以利用F12含有較豐富的成分和DMEM含有較高濃度的營養(yǎng)成分為優(yōu)點(diǎn)。該培養(yǎng)基適用于血清含量較低條件下哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。為了增強(qiáng)該培養(yǎng)基的緩沖能力,改良之一是在DMEM/F12(1:1)中加入15mMHEPES緩沖液。

          6、McCoy’s 

              McCoy’s  Medium 主要為肉瘤細(xì)胞的培養(yǎng)所設(shè)計(jì),可支持多種(如骨髓、皮膚、肺和脾臟等)的原代移植物的生長,除適于一般的原代細(xì)胞培養(yǎng)外,主要用于作組織活檢培養(yǎng)、一些淋巴細(xì)胞培養(yǎng)以及一些難培養(yǎng)細(xì)胞的生長支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纖維細(xì)胞、人淋巴細(xì)胞、HT-29、BHL-100等上皮細(xì)胞。

          7、Iscove’s Modified Dulbecco Medium (IMDM)

              Guilber 和Iscove將Dulbecco’Medium 改良為 Iscove’s Medium,用于培養(yǎng)紅細(xì)胞和巨噬細(xì)胞前體。此種培養(yǎng)液含有硒、額外的氨基酸和維生素、丙酮酸鈉和HEPES。并用硝酸鉀取代了硝酸鐵。IMDM還能夠促進(jìn)小鼠B淋巴細(xì)胞,LPS刺激的B細(xì)胞,骨髓造血細(xì)胞,T細(xì)胞和淋巴瘤細(xì)胞的生長。IMDM為營養(yǎng)非常豐富的培養(yǎng)液,因此可以用于高密度細(xì)胞的快速增殖培養(yǎng)。

          8、M-199 Medium

              1950年,Morgan成功研制出具有確定化學(xué)成分的細(xì)胞培養(yǎng)液,即M-199,主要用于雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)。此培養(yǎng)液必須輔以血清才能支持長期培養(yǎng)。M-199可用于培養(yǎng)多種種屬來源的細(xì)胞,并能培養(yǎng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。

          9、Leibovitz Medium (L-15)

              L-15培養(yǎng)液適用于快速增殖瘤細(xì)胞的培養(yǎng),用于在CO2缺乏的情況下培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞株。此培養(yǎng)液采用磷酸鹽緩沖體系,氨基酸組成進(jìn)一步改良,并由半乳糖替代了葡萄糖。

          10、Ham’s F-10培養(yǎng)基:適應(yīng)小鼠細(xì)胞、人類二倍體的培養(yǎng)。

          11、Ham’s F-12培養(yǎng)基:可以在加入很少血清的情況下應(yīng)用,特別適合單細(xì)胞培養(yǎng)和克隆化培養(yǎng),是無血清培養(yǎng)中常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)液。

          12、William’s Medium E:用于大鼠肝上皮細(xì)胞的長期細(xì)胞培養(yǎng)。

          13、MCDB 131 培養(yǎng)液:用于培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞。

          14、Opti-MEM I Reduced Serum Media:用于培養(yǎng)造血細(xì)胞。

          15、植物血凝素(PHA):增加細(xì)胞轉(zhuǎn)化和DNA合成。

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