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ELISA檢測中不同樣品應(yīng)有不同的處理方法
閱讀：2064 發(fā)布時間：2015-10-9
在進(jìn)行ELISA檢測試驗(yàn)過程中，是否正確處理樣品是Elisa檢測的*步，也是zui重要的一步，一般來說，可用于ELISA檢測的樣本包括血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等等類型，那么這幾種不同類型的樣本在處理方法上都有什么不同呢？
1、對于血清的處理
血清是ELISA檢測中zui常見的一類樣本，處理方法也比較簡單只需用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃過夜，使血清析出。在采血過程中應(yīng)避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色，而導(dǎo)致檢測的不準(zhǔn)確性。同時也應(yīng)避免細(xì)菌污染，因?yàn)榫w內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測的假陽性。
2、對于血漿的處理
對于血漿的處理我們需要用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本，標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。
3、對于細(xì)胞裂解液的處理
1）吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基，用胰酶消化細(xì)胞，加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細(xì)胞可省略。
2）收集細(xì)胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS潤洗3次。
3）加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細(xì)胞。通常6孔板一個孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸。
4）將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復(fù)凍融幾次，使細(xì)胞充分裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎，以達(dá)到裂解的目的。
5） 4℃ 10000×g 離心10min，除去細(xì)胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
4、對于組織勻漿液的處理方法
1）將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。
2）將組織塊稱重，記錄后剪碎，碎塊應(yīng)盡量小，便于勻漿得更充分。
3）將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS（臨用前加入蛋白酶抑制劑）勻漿，勻漿時置于冰上或冰浴中。
4）吸取勻漿液到離心管，4℃ 5000×g 離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。