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Spherisorb色譜柱的使用注意事項

為確保Spherisorb色譜柱始終保持理想性能，請遵循以下原則：

A.保護柱

  在進樣器和分析柱之間使用填料化學性質(zhì)和顆粒大小都適合的沃特世Spherisorb保護柱。使用匹配的保護柱，是保護分析柱而不影響或改變分析分離度的重要措施。保護柱需要根據(jù)樣品污染情況定期更換。當系統(tǒng)背壓穩(wěn)步上升至設定壓力限值時，通常表明需要更換保護柱。突然出現(xiàn)分叉峰或色譜性能發(fā)生其他變化也表明需要更換保護柱。

B. 樣品制備

1. 樣品中的雜質(zhì)往往會污染色譜柱。避免污染的一種方法是在分析之前使用填充適用填料的Oasis固相萃取小柱/色譜柱或Sep-Pak小柱凈化樣品。

2. 制備樣品時，優(yōu)先選用運行分析時要用的流動相，或選用與之相比更弱的流動相(就反相色譜而言，即有機改性劑含量更少；就正相色譜或親水作用色譜而言，即極性改性劑含量更少；就離子交換色譜而言，即鹽含量更少)，以便獲得理想峰形和靈敏度。

3. 如果樣品不溶于流動相，請確保樣品、溶劑和流動相可以混溶，以避免樣品和/或緩沖液產(chǎn)生沉淀。用0.2 μm濾膜過濾樣品，去除顆粒物質(zhì)。如果用于溶解樣品的溶劑含有機溶劑(如乙腈、甲醇等)，請確保濾膜材料不溶于該溶劑。請聯(lián)系濾膜生產(chǎn)商了解濾膜的溶劑兼容性。或者，可以考慮在8,000 rpm下離心樣品溶液20 min，然后將上清液轉(zhuǎn)移至適當?shù)臉悠菲恐小?/span>

C. pH范圍

  Spherisorb色譜柱的推薦pH范圍為2-8。表3列出了常用的緩沖液和添加劑。

此外，柱壽命將根據(jù)操作溫度以及使用的緩沖液類型和濃度而有所不同。例如，在高溫下使用pH值為8的磷酸鹽緩沖液會縮短色譜柱壽命。

D. 溶劑

  為了保持理想的色譜柱性能，請使用高品質(zhì)色譜級溶劑。所有水相緩沖液使用前都必須過濾。推薦使用Pall Gelman Laboratory Acrodisc®過濾器。含有懸浮顆粒物的溶劑通常會堵塞色譜柱入口篩板的外表面，這會導致操作壓力增大，性能變差。使用前，請將所有溶劑徹底脫氣，避免泵和檢測器中形成氣泡。沃特世還建議使用在線脫氣裝置。運行低壓梯度時，溶劑脫氣尤其重要，因為在梯度運行過程中混合水相溶劑與有機溶劑時可能形成氣泡。

E. 壓力

  Spherisorb色譜柱可承受的壓力上限為6,000 psi(400 bar或40MPa)，但為了盡可能延長色譜柱和系統(tǒng)使用壽命，應避免常規(guī)運行壓力長期超過4,000-5,000 psi。

F. 溫度

  為了改善選擇性、降低溶劑粘度和提高傳質(zhì)速率，操作Spherisorb色譜柱推薦的溫度范圍為20-45℃。但是，任何高于室溫的溫度都可能對色譜柱壽命產(chǎn)生不良影響，色譜柱壽命還會根據(jù)pH和緩沖液條件而有所不同。

IV. 故障排除

  保留時間、分離度或柱壓變化通常是色譜柱污染所致。請參閱“色譜柱清洗、再生和存放"。色譜柱故障排除的信息可以在沃特世色譜柱及消耗品簡要指南上查找。