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        1. 上海信裕生物科技有限公司
          中級(jí)會(huì)員 | 第12年

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          當(dāng)前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次人乳頭瘤病毒16染料法熒光定量PCR試劑盒

          人乳頭瘤病毒16染料法熒光定量PCR試劑盒

          參   考   價(jià): 2490 2290

          訂  貨  量: 1-4  件 ≥5  件

          具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

          產(chǎn)品型號(hào)50次

          品       牌其他品牌

          廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

          所  在  地上海

          更新時(shí)間:2020-08-03 15:38:45瀏覽次數(shù):383次

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          供貨周期 一周 規(guī)格 50T
          貨號(hào) XY-0402 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
          主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。
          人乳頭瘤病毒16染料法熒光定量PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類(lèi)皰疹病毒四個(gè)亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,可感染人類(lèi)和其他脊椎動(dòng)物。在自然界廣泛存在,主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,例如:皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。

          人乳頭瘤病毒16染料法熒光定量PCR試劑盒

          Human Papillomavirus 16(HPV-16)

          產(chǎn)品及特點(diǎn)

          人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)是一種屬于乳多空病毒科的乳 頭瘤空泡病毒 A 屬,是球形 DNA 病毒,能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖。表現(xiàn)為 尋常疣、生殖器疣(尖銳濕疣)等癥狀。 隨著性病中尖銳濕疣的發(fā)病率急速上升和宮 頸癌、肛門(mén)癌等的增多,人乳頭瘤病毒感染越來(lái)越引起人們的關(guān)注。其中黏膜高危型 HPV-16、18、30、31、33、35、39 與宮頸癌、直腸癌、口腔癌、扁桃體癌等相關(guān), 其早期檢測(cè)非常重要。本產(chǎn)品就是針對(duì)此需求而建立的一種定量檢測(cè) HPV-16 型病毒 的高靈敏的 PCR 檢測(cè)方法。本試劑盒具有下列特點(diǎn):

          1. 根據(jù) HPV-16 保守區(qū)設(shè)計(jì)的針對(duì) HPV-16 的 PCR 引物,專(zhuān)一性強(qiáng)。

          2. 即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供樣品模板,操作簡(jiǎn)單,定量準(zhǔn)確快速。

          3. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè),避免后續(xù)污染。

          4. 本試劑盒足夠 100 次 20uL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。

          5. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。 

          人乳頭瘤病毒16染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

          編號(hào)

          成分

          規(guī)格

          試劑一

          2×qPCR MagicMix

          1.0 mL(棕色,裝 A 袋)

          試劑二

          超純水

          1 mL(紅蓋,裝 A 袋)

          試劑三

          引物 14-30416F

          1 OD(本色,裝 B 袋) 

          試劑四

          引物 14-30416R 

          1 OD(本色,裝 B 袋) 

          試劑五 HPV-16 陽(yáng)性對(duì)照 (10E8copy/μL) 50 μL(白蓋,裝 C 袋) 
          試劑六 DNA 病毒裂解液(試用裝)  15 次(9 mL) 

          試劑七

          使用手冊(cè)

          1 份

          運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸、-20℃保存(A 袋和 B 袋的試劑放樣品準(zhǔn)備區(qū)、C 袋的陽(yáng)性對(duì)照分開(kāi)放置), 有效期一年。 

          自備試劑   DNA 模板、10×ROX(根據(jù)機(jī)型決定,具體見(jiàn)使用方法)。 

          使用方法 一、樣品 DNA 的制備

          1. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。

          二、引物的制備(在樣品制備室進(jìn)行)

          2. 按引物標(biāo)簽提示在裝引物干粉的管中直接加入適量的超純水(加入量見(jiàn)引物試管上 的標(biāo)簽),使得兩條引物的濃度均為 10 μM(10 pmol/μL),然后各取 50 μL 混合在一起,標(biāo)注為引物混合物,放冰上待用。

          三、稀釋陽(yáng)性對(duì)照(以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高, 因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成 分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照, 只提供可以直接使用的長(zhǎng)為 126bp 的 DNA 段作為陽(yáng)性對(duì)照。

          3. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

          4. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。

          5. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用超純水 10 倍梯度稀釋到 10E8 拷貝/μL。放冰上 待用。

          6. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分 鐘,得 10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

          7. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分 震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

          8. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5 拷貝/ μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

          9. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,得 10E4 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放 冰上待用。重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

          三、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(20 μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)

          10. 在 PCR 管中加入下列成分(待測(cè)樣品需要做三次重復(fù),下表只列出一次。樣品管 和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子 儲(chǔ)存好后后加): 

          成分

          樣品管 N+2 個(gè)

          PCR 陰性 對(duì)照管

          標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管(2-7 管)

          2×qPCR Mix

          10 μL

          10 μL

          各 10 μL

          引物混合物

          2 μL

          2 μL

          各 2 μL

          自備 10×ROX (見(jiàn)注) 

          2 μL

          2 μL

          各 2 μL

          待測(cè)樣品 DNA 模板

          1-5 μL

           

           

          陽(yáng)性對(duì)照(2-7 號(hào))    各 5μL(2 號(hào)樣到 2 號(hào)管,3 號(hào)樣到 3 號(hào)管…) 

          補(bǔ)水到

          20 μL  

           20 μL 

          20 μL 

          11. 蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR(具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行 優(yōu)化)。 

          過(guò)程

          溫度

          時(shí)間

           預(yù)熱95℃1 分鐘 

          預(yù)變性

          95℃

          15 秒 

           

          PCR 反應(yīng)

          (40 個(gè)循環(huán)

          55℃

          15 秒  

           60℃ 15 秒 

          72℃

          60 秒 

          12. 數(shù)據(jù)采集 具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合 DNA 時(shí), 大吸收光譜在 471 nm,結(jié)合 DNA 時(shí)的大吸收光譜在 500 nm,大發(fā)射光 譜在 530 nm。

          13. 根據(jù)所用熒光定量 PCR 儀器的方法進(jìn)行溶解曲線分析(每種儀器可能稍微有所不 同),排除非特異擴(kuò)增。

          四、數(shù)據(jù)處理

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