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上海嘉鵬
主營產(chǎn)品： 超微量分光光度計,核酸蛋白檢測儀,超微量紫外分光光度計,nano光度計,超微量核酸蛋白檢測儀 |
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2022-12-15 閱讀(1874)
那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡單介紹一下蛋白純化常見問題（一）。
Q：如何去除樣品中的 DNA/RNA 等核酸雜質(zhì)污染？
A：延長超聲時間以降低粘度。也可以使用核酸酶如 Benzonase 同時消化 DNA 和 RNA。如果來源是大腸桿菌裂解液，含有大量的DNA，可以用鏈霉素沉淀等方法，預(yù)先去除大量的 DNA。
通過層析方法去除 ：由于核酸帶負電，在陰離子柱上會結(jié)合或陽離子柱上流穿，也可以有效去除核酸。
去除填料上結(jié)合的核酸 ：一般采用 1M NaOH + 1M NaCl 對核酸的去除效果較好。如果核酸的吸附過強，會采用強烈的方法，3M NaCl可去除靠靜電吸附的核酸，然后用 1M NaOH分解核酸，之后再用 3M NaCl 清洗。
Q：柱子有色素如何去除？
A：
色素性質(zhì)較復(fù)雜，可以根據(jù)填料的耐受情況，嘗試使用高鹽、NaOH、有機溶劑（如 30% 異丙醇或乙醇）或酸（如 0.01 M HCl）處理，*好將填料拆出，分別浸泡在不同試劑中。
也可以考慮使用混合試劑進行處理，例如：通過混合8M尿素 + 0.5 M 乙酸 + 2 M NaCl，對于和陰離子交換等介質(zhì)緊密結(jié)合的化合物，通常很有效；或者1 M NaOH混合1-2 M 鹽；可以耐受有機溶劑的情況下，嘗試1 M NaOH混合20-30%的異丙醇；根據(jù)色素的不同性質(zhì)，也可以嘗試不同的去污劑，注意避免操作中產(chǎn)生氣泡。
如果去除不掉，可以定期把色素污染部分的填料去除，或驗證是否對于樣品純化造成影響。
Q：柱子堵了、超壓如何處理？
A：可能原因 ：緩沖液或樣品未進行過濾、蛋白沉淀或雜質(zhì)殘留、清洗不及時等引起層析柱濾膜堵塞 ；流速過快、流動相粘度 ( 如乙醇等 ) 過高、溫度過低。
建議處理方法 ：首先將柱子卸下來，確定是系統(tǒng)還是柱子堵了。如果是柱子堵了 ：參考說明書 CIP 操作進行清潔 ；更換層析柱頂端濾膜或超聲清洗 (Hitrap，HiPrep 與 Precision Columns 3.2/300 柱型均不能拆卸換膜 ) ；必要時移除層析柱頂端 2-3mm 凝膠，調(diào)節(jié) Adaptor消除頂端死體積。部分預(yù)裝柱，也可以將填料倒出，去除板結(jié)或碎填料后，重新裝填。測定柱效或重復(fù)之前做過的樣品。后續(xù)注意樣品前處理（包括上柱子前的離心或過濾處理、優(yōu)化利于樣品穩(wěn)定存在的緩沖液條件、核酸等粘稠雜質(zhì)的去除等）以及層析柱的日常維護。
以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于蛋白純化常見問題（一）。
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